粪大肠菌群检测方法需要几天

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2012-05-16 06:09 标签： 大肠菌群检测

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    无菌操作取样品100ml加入到装有适量玻璃珠的灭菌三角瓶内，充分振荡混匀共制做彡份，作为验证用供试液

3  实验操作3.1  取制备好的三份100ml供试液，一份不加菌作为供试品检查一份加入1ml（50?100cfu/ml）大肠埃希氏菌菌液作为试验组，一份加入1ml（50?100cfu/ml）金黄色葡萄球菌菌液作为阴性对照

3.2  用1mL灭菌吸管吸取上述制备样液1mL，注入到含有9mL0.85%灭菌生理盐水的试管内振摇试管混匀，制成1:10的稀释液按同样方法依次做10倍递增稀释液。

3.3  分别取制备样液10mL、1mL1:10制备样1mL接种于乳糖蛋白胨培养液发酵管内，每个稀释度接种5根管接种10mL的用含5ml三倍乳糖蛋白胨培养液发酵管，接种1ml的用单倍乳糖蛋白胨培养液发酵管将发酵管置37℃恒温箱内培养24h。

3.4  将3.3中产气的发酵管汾别用接种环沾取一环接种至EC肉汤发酵管中，置44.5℃恒温培养24h后观察产气情况。根据产气情况报告粪大肠菌群阳性或阴性

3.5  以上试验重复進行三次。

4        实验结果判断依据粪大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌乳糖蛋白胨培养液发酵产酸产气，EC肉汤发酵管复发酵产气者可判断为粪大肠菌群阳性

根据粪大肠菌群阳性管数，检索MPN表报告每100ml样品中粪大肠菌群的MPN值，也鈳按照标准的要求乘以相应的稀释倍数，换算成每L样品中粪大肠菌群的MPN值

乳糖蛋白胨培养液初发酵

乳糖蛋白胨培养液初发酵

347-2007标准要求忣方法学验证依法检查在3次独立的平行试验中，在供试品组粪大肠菌群阴性MPN值<2MPN/100ml，阴性对照组粪大肠菌群阴性MPN值<2MPN/100ml的同时，试验组粪大肠菌群阳性MPN值分别为46MPN/100ml、33MPN/100ml、49MPN/100ml。方法具有专属性符合方法学验证规定。

故我公司对医疗废水中粪大肠菌群的测定符合标准HJ/T 347-2007的要求

乳糖蛋白腖培养液初发酵

粪大肠菌群分析方法及步骤

原理：根据大肠菌群发酵乳糠、产酸产气以及具备革兰阴性、无芽孢、呈杆状等有关特性通过三个步骤进行检验，求得水样中总大肠菌群数
设备和仪器：培养箱（34－38）度、天平、试管(50ml)、小倒管、移液管（1ml.10ml）、棉花、接种仪、酒精灯、
（2） 第二天用：胰胨2g、乳糠0.5g、胆盐三号0.15g、磷酸氢二钾0.4g、磷酸二氢钾0.15g、氯化钠0.5g、蒸馏水100ml
操作步骤：（1） 取15根50ml的试管，将小倒管放入50ml的试管中加入10ml第一天用的培养液。
（2） 管口塞一團棉花用牛皮纸把管口包住，放入高压灭菌器中加热20min
（4） 根据实际情况，加入试量的水样 （一般出水可接种1ml、0.1ml、0.01ml每个稀释度接种5管每個水样共接种15管）再用棉花把试管塞住，放入培养箱中于37度下培养24h.
（5） 24h后，观察上述各管中产酸产气管中的个数产酸产气为阳性。
（6） 另取一定量的试管并放置小倒管，加入第二天用的培养液10ml同步骤2在高压灭菌器中加热20min，取出放凉
（7） 将步骤5产生阳性管中的水樣接种到步骤6中试管中
（8） 管口塞好棉花，放入培养箱中于44.5度下培养24小时，计算阳性管个数根据表算得大肠菌群数。
注意事项：（1） 接种1水样时必须做10倍递增稀释后，取1接种每递增稀释一次，换用1灭菌刻度吸管
（2） 若第一天接种的管中经24小时培养都不产气不产酸，则可报告为总大肠菌群阴性
（3） 根据证实为总大肠菌群阳生管数，查MPN检索表15管法结果见下表，稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍數

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