齐口裂腹鱼和鲤鱼H-FABP基因的克隆及其表达谱--《中国生物化学与分子生物学报》2011年06期
齐口裂腹鱼和鲤鱼H-FABP基因的克隆及其表达谱
【摘要】：心型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid binding protein,H-FABP)的水平与影响肉质性状的肌内脂肪含量有关,鱼类H-FABP的表达水平对其肌内脂肪含量是否相关仍未见报道.本研究获得齐口裂腹鱼和鲤鱼心脏型脂肪酸结合蛋白基因序列,利用半定量RT-PCR分析其表达特性并测定肌内脂肪含量,比较H-FABP基因在不同生活环境的2种鲤科鱼肌内脂肪沉积中的作用.结果显示,齐口裂腹鱼和鲤鱼H-FABP基因的ORF为402 bp,编码133个氨基酸,它们的氨基酸序列相同,与人、猪、小鼠、斑马鱼、大西洋鲑、虹鳟等的同源性为71.3%～90%;H-FABP基因在2种鲤科鱼的心、肌肉、脂肪、肝、脑、脾、肾和鳃等组织中均有表达,肝中的表达量显著高于其它组织(P0.05),H-FABP基因的肌肉表达谱在齐口裂腹鱼和鲤鱼中存在明显差异:齐口裂腹鱼中的表达随生长发育呈上升趋势,在大体重鱼(500 g)中的表达显著高于小体重鱼(P0.05),其表达与肌内脂肪含量呈显著正相关(R=0.370,P0.05);H-FABP基因在鲤鱼生长发育中呈下降趋势,而小体重鱼(50～60 g)中的表达显著高于其它大体重鱼(P0.05),其表达与肌内脂肪含量呈显著负相关(R=-7.083,P0.01).据此推测,齐口裂腹鱼和鲤鱼肌肉组织H-FABP基因表达与肌内脂肪关联性的差异可能与2种鱼的生活环境不同有关.
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：Q78【正文快照】：
西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金(No.10NZYZJ10);四川省应用基础课题(No.)*联系人Tel:028-;E-mail:.cnReceived:December 23,2010;Accepted:March 25,2011Supported by Fundamental Research Funds for the Central Univ
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京公网安备74号欧拉型藏羊消化系统发育和肌肉H-FABP基因表达规律的研究--《甘肃农业大学》2011年博士论文
欧拉型藏羊消化系统发育和肌肉H-FABP基因表达规律的研究
【摘要】：为了探讨藏羊消化系统发育和肌肉H-FABP基因表达规律,本研究选择分布于青藏高原东部黄河第一大弯处甘肃省玛曲县的欧拉型藏羊为研究对象,将60只公羔分别于0、2、7、14、21、28、42、56、72、84、98和112日龄屠宰,采用大体解剖技术、酶活性分析法、生长曲线拟合方程及real time PCR技术等研究了0~112d(哺乳期)欧拉型藏羊羔羊消化道的发育规律及其瘤胃内主要消化酶活性的发育性变化,羔羊不同生理时期皱胃、小肠内容物及黏膜消化酶、胰腺消化酶活性的变化;羔羊消化器官的生长曲线拟合;H-FABP基因在欧拉羊心脏组织和肌肉组织中的发育性表达,以及与IMF含量的相关性,结果如下:
1欧拉型藏羊消化器官的生长发育及瘤胃内主要消化酶活性的变化
测定了各日龄欧拉型藏羊羔羊体重,肝脏、胰腺重量,复胃及内容物重量,复胃净重,小肠、大肠、盲肠净重、相对重,胃容积及肠长度;测定了瘤胃内容物微生物酶活及各胃室pH。结果表明:(1)欧拉型藏羊羔羊在0~112d的消化道发育迅速,消化道各部位增重明显,容积和长度等指标都显著增加,尤其瘤胃和小肠的增重明显高于其他部位的增重速度;(2)欧拉型藏羊羔羊跟群放牧食入部分牧草可明显刺激瘤胃的发育,70d时,瘤胃pH已接近成年羊水平,并维持在相对恒定的范围内,皱胃pH维持较低水平,呈强酸性;(3)瘤胃微生物酶活性随着日龄增长而提高,其中淀粉酶和木聚糖酶活性增加显著,纤维素酶和果胶酶增加较缓慢,蛋白酶缓慢降低,且纤维素酶活性维持在较低水平,112d时羔羊的消化道及其功能已接近成年水平;(4)在欧拉型藏羊生产实践中,70d断奶较适宜,56d是可接受的最早断奶日龄。
2欧拉型藏羊羔羊消化器官发育的生长曲线拟合分析
采用CurveExpert1.3和SPSS11.5分析软件对不同日龄欧拉型藏羊羔羊各消化器官进行四种曲线拟合。结果表明:欧拉型藏羊早期生长过程中体重、体尺及消化器官的变化符合生物自然生长规律,Richards曲线模型是拟合欧拉型藏羊羔羊体重和胸围早期生长的最优模型,R~2分别为0..9956355;Exponential Association是拟合欧拉型藏羊羔羊体高和体长早期生长过程的最优模型,R~2分别为0..9989817;Gompertz Relation模型是拟合羔羊瘤胃、网胃和瓣胃重量生长曲线的最优模型,R~2分别为0...th Degree Polynomial Fit模型是皱胃、十二指肠、回肠和盲肠以及肝脏和胰脏重量变化拟合的最优模型,R~2分别为0......9987633;Logistic模型是空肠和直肠重量变化拟合的最优模型,R~2分别为0..th Degree Polynomial Fit模型是羔羊各胃室容积变化拟合的最优模型,瘤胃、网胃、瓣胃和皱胃的R~2分别为0....th Degree Polynomial Fit模型是拟合羔羊肠道长度生长曲线的最优模型,十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠的R~2分别为0......9982142。
3欧拉型藏羊羔羊消化道pH及主要消化酶发育规律
取羔羊皱胃粘膜、内容物,小肠粘膜、内容物等以及胰腺,测定其pH和消化酶活性。结果表明:(1)随着欧拉型藏羊羔羊日龄增大,皱胃(内容物、不同部位黏膜)pH呈现下降趋势,均呈强酸性。初生羔羊皱胃(内容物、不同部位黏膜)pH均显著高于其他日龄(P0.05)。羔羊到42d后,皱胃内pH变化基本不大(P0.05);(2)初生羔羊皱胃凝乳酶比活性较高,随着羔羊日龄的增长,酶比活性在迅速降低,在羔羊42d前,皱胃凝乳酶比活性的变化幅度很大,42d后变化幅度较小。皱胃内容物蛋白水解酶比活性相对最低,羔羊皱胃幽门腺区蛋白水解酶比活性低于胃底中部和皱胃贲门腺区(P0.05),胃底中部和皱胃贲门腺区蛋白水解酶比活性无显著差异(P0.05)。42d后皱胃胃底中部黏膜蛋白水解酶比活性基本稳定。初生羔羊有较高的胃前脂酶比活性;(3)羔羊胰腺、小肠pH随日龄变化不大:胰腺均大于7,呈弱碱性。回肠pH高于空肠(P0. 05),空肠的pH高于十二指肠(P0. 05),十二指肠最低。羔羊十二指肠段pH呈弱酸性,空肠和回肠pH呈弱碱性;(4)羔羊出生后小肠内就存在较高的胰蛋白酶和糜蛋白酶活性。空肠胰蛋白酶和糜蛋白酶活性最高,回肠次之,十二指肠最低。随着羔羊日龄的增长,小肠胰蛋白酶和糜蛋白酶活性呈现为增加趋势,70d后羔羊小肠内容物胰蛋白酶和糜蛋白酶活性基本保持在相对稳定状态;(5)羔羊小肠不同部位淀粉酶活性不同,空肠段淀粉酶活性显著高于十二指肠和回肠(P0.05)。随着羔羊日龄的增长,小肠淀粉酶活性持续增加,到84d后小肠各段淀粉酶活性基本处于稳定状态。初生羔羊小肠乳糖酶活性较高,小肠不同部位乳糖酶活性不同,空肠段内容物和粘膜乳糖酶活性最高,十二指肠次之,回肠最低;羔羊小肠粘膜乳糖酶活性显著高于其内容物乳糖酶活性;随着羔羊日龄的增长,小肠乳糖酶活性降低,70d后酶活恒定;(6)不同日龄羔羊小肠不同部位内容物和粘膜脂肪酶活性不同,空肠段脂肪酶活性最高,回肠次之,十二指肠最低,且羔羊小肠内容物脂肪酶活性显著高于其粘膜脂肪酶活性;随着羔羊日龄的增长,小肠脂肪酶活性逐渐升高,到84d后小肠各段粘膜脂肪酶活性基本呈稳定趋势;(7)羔羊胰脏主要消化酶活性随日龄变化不大。
4羔羊肌肉H-FABP基因表达的发育性变化及其对肌内脂肪含量的影响
取2、21、56、84和112日龄欧拉型藏羊公羔(各日龄5只)背最长肌、股二头肌和心脏样品,测定肌内脂肪含量和肌肉H-FABP mRNA表达量。结果表明:(1)随着羔羊日龄的增长,欧拉型臧羊肌肉IMF含量持续上升,不同部位组织IMF含量存在差异;(2)随着羔羊日龄的增长,其肌肉H-FABP mRNA的表达不同,并存在组织差异性,2~21d降低,21d后持续上升,各日龄间差异显著;H-FABP mRNA表达量在21~112d羔羊生长期间与IMF含量呈正相关,表明H-FABP基因在生长发育早期就影响IMF含量,可以作为影响欧拉型臧羊IMF含量的候选基因之一。
【关键词】：
【学位授予单位】：甘肃农业大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2011【分类号】：S826【目录】：
摘要6-9SUMMARY9-13缩略词（ABBREVIATIONS）13-14前言14-16第一部分 文献综述16-37 第一章 欧拉型藏羊研究现状16-22
1 欧拉型藏羊介绍16-19
2 欧拉型藏羊研究概况19-22 第二章 生长模型概述22-24
1 模拟畜禽生长的数学方程22
2 畜禽生长模型概述22-23
3 对生长模型的评价23-24 第三章 反刍动物消化系统及功能的发育概述24-32
1 反刍动物消化系统的发育24-25
2 反刍动物消化功能的发育25-32 第四章 脂肪结合蛋白基因（H-FABP）的研究概况32-37
1 H-FABP 基因的概念32
2 H-FABP 基因的定位32
3 H-FABP 基因的分布32-33
4 H-FABP 基因的结构33-34
5 H-FABP 基因的功能34
6 H-FABP 基因的研究34-37第二部分 试验研究37-131 第一章 欧拉型藏羊消化器官的生长发育及瘤胃内主要消化酶活性的变化37-59
2 材料与方法37-40
2.1 牧场概况37-38
2.2 试验设计及试羊饲养管理38-39
2.3 测定指标与测定方法39-40
3 结果与分析40-54
3.1 羔羊胃室的日龄变化40-45
3.2 羔羊胃室机能的日龄变化45-49
3.3 不同日龄羔羊肠道及胰腺、肝脏的变化49-53
3.4 羔羊胃肠道相对重量（%胃肠道总重）的日龄变化53-54
4 讨论54-58
4.1 羔羊消化器官的发育54-57
4.2 羔羊瘤胃pH 的变化57
4.3 羔羊瘤胃微生物酶活的日龄变化57-58
5 小结58-59 第二章 欧拉型藏羊消化器官发育的生长曲线拟合分析59-96
2 材料与方法59-60
2.1 材料59-60
2.2 方法60
3 结果与分析60-88
3.1 欧拉型藏羊羔羊体重和体尺60-65
3.2 欧拉型藏羊羔羊消化器官65-77
3.3 欧拉型藏羊羔羊各胃室容积及肠道长度的曲线模型77-88
4 讨论88-93
4.1 欧拉型藏羊体重、体尺的变化88-89
4.2 消化器官的变化89-93
5 小结93-96 第三章 欧拉型藏羊消化道pH 及主要消化酶发育规律的研究96-119
2 材料与方法96-98
2.1 牧场的选择96
2.2 实验动物（羊只）的选择96
2.3 样品的采集96-97
2.4 样品的预处理97
2.5 测定指标与测定方法97
2.6 数据的统计分析97-98
3 结果分析98-110
3.1 皱胃pH 及消化酶的发育变化98-101
3.2 羔羊胰腺、小肠pH 的日龄变化101-102
3.3 羔羊小肠消化酶比活性的日龄变化102-109
3.4 羔羊胰脏中各种消化酶活性的日龄变化109-110
4 讨论110-118
4.1 部分消化器官及消化腺pH 的变化110-111
4.2 皱胃消化酶的变化111-112
4.3 小肠蛋白酶活性的变化112-113
4.4 小肠碳水化合物酶活性的变化113-116
4.5 小肠脂肪酶活性的变化116-117
4.6 胰腺消化酶的变化117-118
5 小结118-119 第四章 欧拉型藏羊肌肉H-FABP 基因表达的发育性变化及其对肌内脂肪含量的影响119-131
2 材料与方法119-122
2.1 试验材料119-121
2.2 方法121-122
2.3 数据分析122
3 结果与分析122-127
3.1 欧拉型藏羊羔羊肌肉IMF 含量122-123
3.2 样品总RNA 的质量检测123
3.3 H-FABP 基因及GAPDH 基因RT-PCR 扩增结果123-124
3.4 H-FABP 和GAPDH 基因的克隆测序结果124-125
3.5 欧拉型藏羊肌肉H-FABP m RNA 表达的变化规律125-127
3.6 欧拉型藏羊肌肉H-FABP m RNA 表达与IMF 含量的相关分析127
4 讨论127-130
4.1 欧拉型臧羊肌肉IMF 含量127
4.2 关于总RNA 的提取127-128
4.3 欧拉型臧羊肌肉H-FABP m RNA 表达的变化128-130
5 小结130-131本研究的结论、创新点及尚待进一步解决的问题131-134 1 结论131-132 2 创新点及理论意义132 3 需要进一步解决的问题132-134参考文献134-146附录146-168 一 酶活测定方法146-161 二 H-FABP 基因表达测定方法161-168作者简介168-169导师简介169-170致谢170
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