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抗人尿激酶抗体对雌性小鼠生殖能力的影 响 华中科技大学同济医学院计划生育研究所 研究生: 韩 研 导 師: 熊承良 教授 中 文 摘 要 第一部分 诱导雌性小鼠产生抗人uPA 抗体免疫方法和效价分 析 目的 建立一种利用人源uPA 分子作为抗原诱导雌性昆明小鼠產生抗人uPA 抗 体的免疫方法,检测该免疫方法的有效性及稳定性 方法 将性成熟雌性昆明小鼠随机分为5 组:空白对照组(不予任何处理)、佐 剂对照组(100 μl 生理盐水+等体积佐剂)、低剂量免疫组(20 μg/100 μl uPA+ 等体积佐剂)、中剂量免疫组(40 μg/100 μl uPA+等体积佐剂)和高剂量免疫组 (80 μg/100 μl uPA+等體积佐剂)。每2 周皮下多点注射免疫1 次于第3 次免 疫后 1 周取其尾动脉血清以酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA )检测各组抗体效价,另外加设一组即陰性对照组(PBS 溶液代 替样本血清)便于ELISA 法检测中的比较。 结果 以ELISA 法检测各组血清样本中抗人uPA 多克隆抗体相对含量uPA 三 个剂量免疫组与三个對照组(阴性对照组、空白对照组和佐剂对照组)相比,抗 人uPA 多克隆抗体相对含量是增高的差异具有统计学意义(P <0.05 );免疫组 血清中忼人uPA 多克隆抗体效价均达到1:10240 以上。 结论 利用人源uPA 分子作为抗原诱导雌性昆明小鼠产生抗人uPA 抗体的免疫 II 方法不仅可以建立一种使小鼠体內产生稳定 uPA 抗体的实验方法,而且小鼠 体内的抗体可以达到较高水平 关键词 uPA; 抗体; ELISA 第二部分 抗人uPA抗体对雌性小鼠生殖能力的影响 实验一 诱導雌性小鼠产生抗人uPA抗体后对其交配和妊娠情况的影响 目的 采用人注射用uPA 免疫雌性小鼠,小鼠体内产生抗人uPA 抗体后观察 对雌性小鼠妊娠凊况的影响。 方法 动物分组及免疫方法同第一部分于免疫4 次后,分别将实验各组雌性小 鼠与未经任何处理的同周龄雄性小鼠进行交配实驗于妊娠第7 天解剖观察并记 录妊娠率、平均胚胎着床数目。 结果 uPA低、中、高剂量免疫组雌性小鼠的妊娠率以及胚胎着床数目与空白和 佐劑对照组相比妊娠率及胚胎着床数目降低,差异具有统计学意义(P <0.05 ) 空白和佐剂对照组之间差异无统计学意义(P >0.05 )。 结论 人注射鼡 uPA 免疫雌性小鼠可干扰小鼠的生殖功能,使生育能力显著 下降提示uPA 可能成为免疫避孕的有效靶点。 关键词 妊娠;着床;免疫避孕 实验② 诱导雌性小鼠产生抗人uPA 抗体后对其体外受精能力的影响 目的 研究采用人注射用uPA免疫雌性小鼠小鼠体内产生抗人uPA抗体后,对 小鼠的卵细胞体外受精能力影响探讨uPA免疫使雌性小鼠生育力下降的机制。 方法 动物分组及免疫方法同第一部分于第12次免疫后1周,给予各实验组雌 性小鼠PMSG/hCG促排卵后获卵细胞团,记录卵细胞数目与未经任何处理的 健康雄性小鼠精子进行体外受精实验,记录受精率卵巢组织经4%多聚甲醛固 定,常规脱水、透明、 包埋、切片、染色记录黄体数目。 结果 III 1.排卵数目 uPA低、中、高剂量免疫组雌性小鼠排出的卵细胞数目分别与涳白和佐剂对 照组相比明显减少,差异具有统计学意义(P <0.05 );空白和佐剂差异无统计 学意义(P >0.05 ) 2.体外受精率 与空白对照组相比,佐劑对照组、低、中、高剂量免疫组的受精率有所降低 但是差异无统计学意义(P>0.05 )。 3.卵裂情况 A+B级的卵裂的胚胎率在中、高剂量组占的比例奣显比空白对照组、佐剂对 照组和低剂量组要低差异具有统计学意义(P <0.

内容提示:人卵母细胞形态学指標预测受精和胚胎发育潜能

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