山楂属果实提取物的体外抗氧化活性技术应用-中国食品添加剂网
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山楂属果实提取物的体外抗氧化活性
&&&时间： 22:43:00&
&&&&&&&&山楂属果实提取物的体外抗氧化活性 &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&杨磊&&贾佳&&&祖元刚 &&&&（东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室哈尔滨150040） &&&&摘要：为充分开发利用山楂属植物资源，采用DPPH法、ABTS法、还原能力测定和FRAP法对山楂、野山楂和毛山楂果实提取物进行体外抗氧化活性研究，并测定其中总酚、总黄酮和低聚原花青素含量。结果显示，每克鲜果中，野山楂、毛山楂和山楂的总酚含量依次为14.8、0.5、0.12&mg，黄酮含量依次为20.6、7.4、0.32&mg，低聚原花青素含量依次为46、3.5、4.46&mg；3种果实提取物皆有优良的抗氧化活性，它们的DPPH清除能力从高到低依次为：野山楂、毛山楂、山楂；ABTS清除能力、还原能力和铁还原能力从高到低依次为：野山楂、山楂、毛山楂。 &&&&关键词：山楂&&&野山楂&&&毛山楂&&&抗氧化活性&&&总酚 &&&&文章编号：（8-05 &&&&自由基是体内新陈代谢的产物，在正常生理情况下，它的产生和清除处于动态平衡，但在空气、水污染、食物添加剂、农药、重金属、辐射等引起的某些病理情况下，自由基大量积累，使生命大分子氧化损伤，从而引发多种疾病[1]。寻求利用人体易于吸收、可清除体内过量自由基的外源天然抗氧化剂成为新的研究热点。 &&&&山楂、野山楂和毛山楂均属于蔷薇科山楂属植物，其中山楂（Crataegus&pinnatifida&Bunge）和毛山楂（C.maximowiczii&Schneid.）在我国北部常见栽培，野山楂（C.cuneata）则多分布于我国南方各省。山楂具有很高的药用价值。祖国医学认为山楂能够消食健胃、行气散瘀，用于肉食积滞、心腹刺痛、高血脂症等[2]，具有明显的扩张血管及降压作用，有增强心肌、抗心律不齐、调节血脂及胆固醇含量的功能。山楂的多种提取物均具有良好的自由基清除能力[3~6]，可以清除体外活性氧和保护DNA不受损伤[7～8]。山楂中含有的萜类物质及黄酮还可以降低油的氧化作用[9]。有关这方面的研究报道较多，但对于同属植物———野山楂和毛山楂的研究截止发稿前尚未见报道。为充分利用这些植物资源，对3种山楂果实提取物进行总酚、总黄酮及原花青素含量测定，并对其体外抗氧化作用进行比较研究。旨在为山楂属功能性食品及天然抗氧化剂的开发提供参考。 &&&&1·材料与仪器 &&&&鲜果2007年10月采摘于东北林业大学树木园，经聂绍荃教授鉴定为山楂、野山楂、毛山楂的果实。 &&&&2，2-吖嗪双（3-乙基-7-苯并噻唑啉磺酸）二铵盐（ABTS）、水溶性维生素E（Trolox）、三吡啶三吖嗪（TPTZ）、1，1-二苯代苦味酰基自由基（DPPH）、二丁基羟基甲苯（BHT）、特丁基-4羟基茴香醚（BHA）、L-抗坏血酸（VC）、维生素E（VE），购自美国Sigma公司；芦丁和没食子酸对照品，购自中国药品与生物制品检定所；原花青素对照品（纯度95%），购自天津尖峰天然产物研究开发有限公司；其它试剂均为国产分析纯。 &&&&UV-2550型紫外分光光度计，日本岛津公司；HZS-HA型水浴振荡器，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司；RE-52AA型旋转蒸发仪，上海青浦沪西仪器厂；SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司。 &&&&2·试验方法 &&&&2.1样品制备方法 &&&&将去核后的3种鲜果果肉各20&g冷冻，液氮研磨，置500&mL具塞磨口锥形瓶中，加入200&mL70％乙醇溶液，浸提24&h；抽滤，滤液减压浓缩除乙醇（55℃，-0.09&MPa），水相用等体积石油醚萃取除杂3次，再用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩至干。所得浸膏质量：山楂2.738&g、毛山楂3.446&g、野山楂3.666&g，保存备用。 &&&&2.2总酚含量的测定 &&&&采用Folin-Ciocalteu法[10]测定试样的总酚含量并稍作改动。以没食子酸为对照品。标准曲线：y=91.945x+0.0859，相关系数R=0.9929，线性范围0.&mg/mL。 &&&&2.3总黄酮含量的测定 &&&&试样总黄酮含量的测定参照文献[11]，并稍作改动。取一定浓度的样品水溶液1&mL，与2&mL去离子水、0.5&mL&5%亚硝酸钠混合，振荡后静止放置6&min，加入0.5&mL&10%硝酸铝，振荡后放置6min，然后加入2.5&mL&5%氢氧化钠，振荡后放置15&min，最后用去离子水定容至9&mL。于波长500nm处测定混合液的吸光值，以芦丁为对照品，标准曲线y=12.464x+0.0264，相关系数R2=0.9987，线性范围0.02~0.2&mg/mL。 &&&&2.4低聚原花青素含量的测定 &&&&采用盐酸-正丁醇法[12]测定试样中低聚原花青素的含量。以95%的低聚原花青素为标准品，标准曲线y=2.5，相关系数R2=0.9993，线性范围0.08~0.2&mg/mL。 &&&&2.5抗氧化能力测定 &&&&2.5.1&DPPH清除能力的测定参照文献[13]的方法并稍作改动。将3种果实粗提物配制成质量浓度分别为100、87.5、75、62.5和50μg/mL的甲醇溶液。各取0.1&mL，加入3.9&mL&25&mg/L&DPPH甲醇溶液，迅速混匀后避光放置30&min，于517nm处测定吸光值。以相同体积的甲醇代替试样，测定其吸光值作为空白对照。清除DPPH自由基能力用SC%表示，即SC%=（1-A样/A对照）×100%。式中A对照为不加样品的溶液在t=0时的吸光值。所有吸光值为3次测定结果的平均值。 &&&&2.5.2&ABTS清除能力的测定将3种果实粗提物配制成质量浓度分别为100、86.7、73.3、60和46.7μg/mL的甲醇溶液。根据Wanwisa&Binsan等人的方法[14]比较各试样的ABTS自由基清除能力。所有吸光值为3次测定结果的平均值。线性回归方程y=-0.001x+0.5994，相关系数R2=0.9976，线性范围50～600μmol/L。 &&&&2.5.3还原能力的测定[15]将3种果实粗提物配制成质量浓度分别为100、80、60、40和20μg/mL的甲醇溶液。根据Amin&Ardestani和RaziehYazdanparast的方法[12]比较试样的还原能力。所有吸光值为3次测定结果的平均值。 &&&&2.5.4铁还原能力的测定[16]将3种果实粗提物配制成质量浓度分别为100、80、60、40和20μg/mL的甲醇溶液，同样依据文献[12]中铁还原能力测定法，测定试样的铁还原能力。所有吸光值为3次测定结果的平均值。线性回归方程y=0.，相关系数R2=0.998，线性范围50～600μmol/L。 &&&&3·结果与分析 &&&&3.1总酚、总黄酮及低聚原花青素含量3种果实的总酚、总黄酮及低聚原花青素含量见表1。
&野山楂中这3种物质的含量明显高于毛山楂和山楂，毛山楂中除低聚原花青素含量低于山楂外，其它两项均高于山楂。 &&&&3.2抗氧化能力测定 &&&&3.2.1&DPPH·清除能力DPPH·是一种稳定的自由基，其甲醇溶液呈紫红色，在517&nm处有最大的吸光度。抗氧化剂能够给自由基提供氢原子和电子并使其退色。该方法是基于抗氧化剂清除DPPH·，以引起紫红色消褪来定量检测。体系内DPPH·的浓度与其吸光度呈正比，吸光度越低，物质对DPPH·的清除率越高，该物质的抗氧化能力越强。从图1可以看出，在0~100μg/mL有效质量浓度范围，随着溶液质量浓度的增加，DPPH清除能力逐渐增强。3种果实中，野山楂的DPPH清除率明显高于毛山楂和山楂，且高于合成抗氧化剂———VE和BHT，但不及VC和BHA；毛山楂的DPPH清除率略高于BHT，山楂的DPPH清除能力最弱。因此野山楂具有极好的DPPH清除能力，毛山楂具有较好的DPPH清除能力。综合本文3.1节的结论，DPPH清除能力与总酚和黄酮含量呈明显的量效关系。
&3.2.2&ABTS·清除能力ABTS氧化后生成相对稳定的蓝绿色水溶性自由基，水溶性抗氧化剂与ABTS+自由基发生反应使其溶液退色。退色越明显，表明该物质的抗氧化能力越强。从图2可以看出，在0~100μg/mL有效质量浓度范围，随着溶液质量浓度的增加，ABTS清除能力逐渐增强。3种果实中野山楂的ABRS清除能力最强，仅次于BHA，明显高于BHT、VC和VE；山楂的ABRS清除能力次之，毛山楂的ABTS清除能力最弱，但也略高于VE。因此野山楂具有极好的ABTS清除能力，毛山楂和山楂具有较好的ABTS清除能力。综合本文3.1节的结论，ABTS清除能力与低聚原花青素含量呈正相关。
&&3.2.3还原能力一般情况下，样品的还原力与抗氧化活性有明显的相关性[13]。从图3可以看出，在0~100μg/mL有效质量浓度范围，随着溶液质量浓度的增加，还原能力逐渐增强。3种果实中野山楂的还原能力最强，仅次于BHA和VC，与BHT相当，明显高于VE；山楂次之，毛山楂最弱，但也与VE的还原能力相当。因此野山楂具有极好的还原能力，毛山楂和山楂具有较好的还原能力。综合本文3.1节的结论，低聚原花青素含量与还原能力呈正相关。
&3.2.4铁还原能力Fe3+-三吡啶三吖嗪（TPTZ）可被样品中的还原物质还原为二价铁，呈蓝色，于593&nm处有最大光吸收。从图4可以看出，在0~100μg/mL有效质量浓度范围，随着溶液质量浓度的增加，铁还原能力逐渐增强。3种果实中野山楂的铁还原能力最强，低于BHA，明显高于VC、VE和BHT；山楂次之，与BHT和VE的铁还原能力相当；毛山楂最弱，但也与VC的铁还原能力相当。因此野山楂具有极好的铁还原能力，毛山楂和山楂具有较好的还原能力。综合本文3.1节的结论，低聚原花青素含量与还原能力呈正相关。
&&4·结论 &&&&山楂、野山楂和毛山楂均为蔷薇科山楂属植物。测定了它们果实提取物的总酚、总黄酮和低聚原花青素含量。其中野山楂总酚、总黄酮和低聚原花青素含量最高，毛山楂中除低聚原花青素外，其它两种物质含量均高于山楂。 &&&&采用DPPH法、ABTS法、还原能力测定和FRAP法对3种果实提取物进行体外抗氧化活性研究，结果表明，3种果实提取物皆有良好的抗氧化活性，DPPH清除能力从高到低依次为野山楂、毛山楂、山楂，与总黄酮、总酚含量呈正相关；ABTS清除能力、还原能力和铁还原能力从高到低依次为野山楂、山楂、毛山楂，与低聚原花青素含量呈正相关。其中野山楂的抗氧化活性明显高于山楂和毛山楂，甚至高于某些人工合成抗氧化剂。 参考文献 1.郑荣梁.自由基生物学[M].北京：高等教育出版社，. 2.时岩鹏，丁杏苞.山楂化学成分的研究[J].中草药，）：173～174. 3.Predrag&L，Irina&P，Uri&C，et&al.Antioxidant&activity&of&Crataegus& aronia&aqueous&extract&used&in&traditional&Arabmedicine&in&Israel [J].Journal&of&Ethnopharmacology，（1-3）：153～161. 4.徐静，郭长江，韦京豫，等.一次性灌胃不同水果汁对大鼠外周血抗氧化力影响的研究[J].中国食品学报，）：18～21. 5.赵爱云，杨宏，周德芳.山楂水溶性黄酮的制取及抗氧化活性研究[J].青岛大学学报（工程技术版），2007，（4）：50～54. 6.回瑞华，侯冬岩，刘晓媛，等.山楂果中黄酮化合物的光谱分析及抗氧化性能测定[J].食品科学，2006，（1）：199～202. 7.张瑞巧，刘石磊，孙智达，等.山楂果肉原花青素的体外抗氧化活性和对DNA损伤的保护作用[J].天然产物研究与开发，1～133，128.
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Hawthorn Extract P.E
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Hawthorn Extract P.E山楂叶提取物
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Hawthorn Extract P.E
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Package:& 25kg、fiber drum，or at customer&s requirements
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&& Shelf life:& 2 years&
山楂叶提取物
【产品名称】山楂叶提取物
【别&&& 名】红果、棠棣、绿梨
【英文名称】Hawthorn Extract P.E （CAS NO: ）
【拉丁名称】Fructus Crataegi
【产品来源】 山楂叶提取物系从蔷薇科植物山楂Crataegus pinnatifida Bge. var.major N. E. Br.叶或果的提取物。
【产　　地】１.山里红分布于华北及山东、江苏、安徽、河南等地
　　　　　　２.山楂分布于东北及内蒙古、河北、山西、陕西、山东、江浙、江南等地
【功效】消食健胃，行气散瘀。用于肉食积滞，胃脘胀满，泻痢腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，心腹刺痛，疝气疼痛；高脂血症。焦山楂消食导滞作用增强。用于肉食积滞，泻痢不爽。
【产品性质】山楂提取物是深棕色或棕褐色精细粉末
【有效成分】黄酮
【规格】10 % 20%
【分子式】C17H21NO4
【检测方式】uv
【工艺流程】&原料&乙醇提取&浓缩&浸膏&喷雾干燥&粉碎、混合、包装&产品
【化学成分】含绿原酸（chlorogenic acid）、咖啡酸、山楂酸( crataegolic acid)、齐菊果酸、槲皮素、金丝桃甙（hyperin）、表儿茶精（epicatechin）等
【植物描述】植物形态　落叶灌木。枝密生，有细刺，幼枝有柔毛。叶倒卵形，长2-6cm，宽0.8-2.5cm,先端常3裂，基部狭楔形下延至柄，边缘有尖锐重锯齿。伞房花序，总花梗和花梗均有柔毛，花白色。梨果球形或梨形，红色或黄色，直径约1-2cm，宿萼较大，反折。花期5-6月，果期8-10月。
【采收时间】秋季果实成熟时采收，切片,干燥.
【药理作用】（ 1）强心作用：山楂有增加肌收缩力，增加心输出量，减慢心律的作用。
& （ 2）对冠脉血流量及心肌耗氧量的作用：山楂提取物及其总黄酮有增加冠脉血流量，降低心肌耗氧量和心肌氧利用率的作用。
& （ 3）对心肌营养性血流量的作用：山楂对心肌营养性血流量有一定的增加作用，山楂对心肌营养性血流量增加作用，可能与扩张冠脉血管床、改善冠脉循环有关。
& （ 4）对实验性心肌缺血的保护作用：山楂对豚鼠由硫酸异丙肾上腺素所致急性心肌缺血具有保护作用。山楂提取物有预防或减轻异丙肾上腺素牙起心肌缺血或坏死作用。
& （ 5）降压作用：山楂乙醇提取液有较持久的降压作用。
& （ 6）降血脂作用：山楂的不同提取部分对不同动物造成的各种高脂模型有较肯定的降脂作用，可拮搞高脂饲料引起的血清胆固醇及甘油三酯含量升高。
【质量指标】
＜ 100cfu/gm
霉菌和酵母菌
＜100CFU/gm
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