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【求助】有人做过人TNF-a ELISA 实验吗？
【求助】有人做过人TNF-a ELISA 实验吗？
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这个帖子发布于7年零29天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我做了人血清TNF-a
ELISA 实验，但出来的都是负值，正常人的也试了，不行，哪位高手指点一下，到底血清中的TNF-a
能不能检测出来，非常感谢！
回复：【求助】有人做过人TNF-a ELISA 实验吗？
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肿瘤坏死因子(TNF-a)是一种具有广泛生物学活性的细胞因子，主要由激活的单核-巨噬细胞所分泌，参与机体的免疫调节与炎症反应，也是某些感染性疾病和肝脏损伤的致病因素。正常人体液中的TNF-a水平一般在100pg/ml以下，当患有某些疾病时， TNF-a水平可有不同程度增高。因此，检测患者体液中的TNF-a水平，具有一定的临床意义。本试剂盒采用双抗夹心法测定人血浆或血清中的肿瘤坏死因子，包被抗体及检测抗体采用鼠抗人肿瘤坏死因子单克隆抗体，用生物素、亲和素辣根酶标记检测系统，测定人血清或血浆中的肿瘤坏死因子。试剂组成1．
125pgx25．
50mlx2 (用前加蒸馏水450mlx2)6．
检测抗体稀释液
酶结合物稀释液
12ml13．说明书
1份实验前准备：1、
请将检测抗体稀释液全部加入检测抗体中，配成工作液，工作液两周内用完；2、
请将酶结合物稀释液全部加入酶结合物中，配成工作液，工作液两周内用完。操作程序(恒温箱温育，微孔板直接放入箱内；水浴锅温育，微孔板放入温育盒内，盒内温度应达37℃)1．
标本：待测定的血标本，应立即离心分离出血清或血浆(肝素和EDTA抗凝血)，测定前存于—80℃。2．
取出与待测定样品相应量的板孔，标记。其余板放回装有干燥剂的原包装袋里。3．
标准品配制：取标准品1支加500ul标准品液,混匀,全部吸出加入另一支标准品中（A：500pg/ml），取1ml小离心管7支（B、C、D、E、F、G、H），分别加入250ul标准品液，H管为零对照管，从A管吸取250ul加入B管，混匀（B： 250pg/ml）依次倍比稀释至G管（C： 125pg/ml,D：62.5pg/ml，E：31.25pg/ml，F：15.6pg/ml,G：7.8pg/ml）4．
加样：样品孔，每孔加20ul样品液、80ul血清或血浆；标准品孔，各标准品每孔加100ul，做复孔， 37℃2小时。5．
洗板：300ul/孔1x清洗液,甩去,在干净的吸水纸上拍干。如此洗三遍。6．
加检测抗体：100ul/孔，37℃2小时。洗板同5，洗四遍。7．
加酶结合物：100ul/孔，37℃30分钟。洗板同5，洗五遍。8．
显色：显色液A 50ul/孔，显色液B 50ul/孔（先加A液再加B液，不得先加B液，也可等量的A液与B液混合，100ul/孔），37℃ 30分钟（从加B液算时间）。10．终止：终止液100ul/孔，按显色液加样顺序加样。11.
测定450nm 的OD 值。用 OD值对已知浓度的标准品作图，测定样品浓度。样品的浓度应乘上样品的稀释倍数1. 25。样品若不在线性范围，可对稀释度进行调整。技术指标
灵敏度高，4pg/ml；
特异性强，不与小鼠及其它动物源TNF交叉；3．
线性范围：8pg/ml-500pg/ml，结果重复 可靠。4．
精密性：批内CV值8%，批间CV值12% 。注意事项1.
温育时勿需封膜或加盖板盖。2.
样品及标准品稀释应准确。血样品应按传染性材料处理。3.
稀释后的标准品若不能立即使用，应尽快放置在4℃。稀释后的标准品仅供当天使用。4.
洗板后应注意拍干，并应注意尽
快加下一步的反应液。5.
每板每次测定均需做标准曲线。不同操作人员、温育温度、温育时间、洗板、加样时间、标本稀释均对测定结果有影响。稀释加样时间不可太长。样品应备份。
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谢谢，和我用的试剂盒稍有不同，照您所说就是能用elisa测出来，但是我怎么就测不出来呢？郁闷！
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你用的是哪家公司的产品，标准曲线如何。说一下具体操作。人血清TNF-a的ELISA检测是非常常用的指标，产品比较成熟。
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我用的是博士德的试剂盒，是严格按照说明书操作的，标准曲线还可以，但是作了好几次了，用各种血清，包括新鲜正常人血清也不行，都是负值，郁闷哪，请高手指教，多谢！
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你是不是用的进口分装的试剂盒啊？要用进口试剂盒，价格虽然贵些，结果有保证。
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人肿瘤坏死因子a（TNF-a）Elisa检测试剂盒
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Recombinant Murine TNF-a
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联 系 人： 刘平
电　　话： 86-021-
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Recombinant Murine TNF-a
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Recombinant Murine TNF-a
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Recombinant Murine TNF-a
在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本
标准品，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的
&预孵育&时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。
Recombinant Murine TNF-a
保存：部分试剂保存于
℃，部分试剂保存于
℃，具体以标签上的标示为准。浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
Recombinant Murine TNF-a
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