流式细胞仪原理_百度文库
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流式细胞仪原理|
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流式细胞仪检测HLA-B27抗体用量的探讨
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3秒自动关闭窗口中心实验室主要技术简介--BD FACSAria流式细胞仪
次, 发表日期:
&&&&美国BD公司生产的FACS Aria流式细胞分选仪是目前最先进的流式细胞仪，可充分满足临床与科研的需要。它为流式细胞仪高速分选和多色分析技术设定了更新更高的标准。该仪器的设计采用了全新理念，极大地简化了高速分选和多色分析的操作和实验要求。一、性能和特点BD FACS Aria流式细胞分选仪是全球独一无二的台式高速细胞分选仪，使用石英杯流动检测池固定光路校准技术。该流式细胞仪的荧光检测灵敏度极佳，而仪器维护和调校则非常简单。其系统软件的分选设定和监测功能大大简化了操作，仪器内置的BD AccuDrop系统可以快速准确地确定液滴延迟时间。液流监测系统自动监测液流断点，检查堵塞，从而实现了细胞分选的无人操作。BD FACS Aria流式细胞的具体性能和特点包括以下方面：1.它是全球第一台台式高速细胞分选仪，使用石英杯流动检测池固定光路校准技术，不需每日调整光路，仪器随开随用；2.其核心&石英杯流动检测池&的荧光检测灵敏度极佳，&125 mesf；3.可以使用达三根激光：波长分别为407nm、488nm和633nm；4.分析速度达70,000～100,000细胞/秒，分析速度达50000细胞/秒；5.具备多色分析，分析参数可达15色之多，并且可以调节任何荧光参数之间的补偿；6.采用完全数字化电子处理系统，分辨率达262,144道，分选精度达1/32液滴，荧光检测分辨率 CV & 3.0% （488 nm 激光）；7. 分选纯度及回收率：纯度&98%, 回收率& 80%；8.液流系统车装载鞘液、废液和洗液，液流自动控制系统，软件自动清洗程序；9.能够容纳不同大小的进样管，进样仓自动加压，自动混匀样本，自动冲洗进样管路，还可以控制进样仓的温度；10.喷嘴选择70mm或100mm，满足绝大多数细胞分选的要求，喷嘴拆换简便、精确；11.两路或四路分选，可以使用细胞培养板、微管、15ml试管等多种规格的分选收集装置；12.配件BD ACDU装置，可以在微孔板或载波片上定量分选细胞；13.软件自动仪器控制和计算分选设置，液滴监控，自动检查堵塞，并具有报警功能；14.拥有样本和分选细胞冷却系统；15.配件BD AMO系统，工作时可控制浮质，避免污染；15.工作无特殊环境要求，不需要额外辅助设备。二、功能BD FACS Aria流式细胞仪以其优越的性能，目前已广泛应用于临床检测和科研领域，主要适用于细胞生物学、免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、遗传学、临床检验学等单细胞或其它生物颗粒的定量分析和分选。使用该仪器可进行的临床检测项目主要有：常规免疫功能检测（包括T、Th、Ts、B、NK细胞的百分率）、细胞活化指标的检测（CD69、CD25、CD71、HLA-DR等）、细胞因子的检测、艾滋病的实验室诊断（CD4阳性细胞的绝对数）、白血病及淋巴瘤的免疫分型及微小残留白血病（MRD）的检测、造血干细胞的计数（CD34）、网织红细胞和网织血小板的检测、巨大血小板症和血小板无力症的诊断（血小板膜糖蛋白的检测）、血小板活化率的检测、阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）的诊断（CD55、CD59）、强直性脊椎炎的诊断（HLA-B27抗原的检测）、细胞周期及DNA倍体的检测、细胞凋亡的检测、多药耐药的检测、肿瘤基因标志物的检测、黏附分子检测等。目前临床上应用BD FACS Aria流式细胞分选仪主要开展的检验项目及临床意义包括以下几个方面：（一）常规免疫功能检测淋巴细胞及其亚群细胞免疫标记，用于免疫功能评价进行T细胞亚群及活化T细胞分析。1.进行T细胞亚群分析：在正常机体内，淋巴细胞各亚群的数量和功能发生异常时，就可能导致机体免疫功能紊乱并发生一系列的病理变化。可用于辅助临床疾病诊断，探索发病机理、对病程及预后进行监控，对放化疗后骨髓抑制及免疫功能的重建，器官移植前、后的免疫状态监测，预防GVHD等具有指导价值。如CD3&：见于自身免疫性疾病，如SLE、类风湿性关节炎等。CD4&：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、使用化疗或免疫抑制剂后。CD8&：见于自身免疫性疾病、变态反应性疾病。CD4/CD8&：见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、变态反应性疾病、移植排斥反应等；CD4/CD8&：艾滋病。在血液系统肿瘤、实体瘤、免疫缺陷病、艾滋病、和某些病毒感染，NK&，宿主抗移植物反应者，NK&。2.进行活化T细胞分析：细胞活化的检测也是免疫状态评价（例如药物作用、化疗、移植、寄生虫感染、营养失调、创伤等）的一个重要组成部分，流式细胞仪可以帮助检测各种活化指标，如：CD69、CD25、CD38、HLA-DR等。CD8/CD38/CD3/Anti-HLA-DR可用于研究艾滋病人活化Ts细胞的百分数和绝对计数;病毒感染性疾病,如EBVCMV;移植排斥反应;慢性炎症性疾病,如SLE、风湿性关节炎等。3.进行CD4阳性细胞绝对计数分析：随着AIDS病患者的增多，人们对于这种疾病的诊断与治疗也越来越重视。CD4阳性细胞的个数是实验诊断的重要指标之一，到目前为止，没有任何一种方法能够替代流式细胞仪提供更方便、准确的CD4计数结果。此外，流式还可随时监控AIDS病的进程和疗效。（二）细胞周期和DNA倍体检测1.进行肿瘤早期诊断、预后估计运用流式细胞仪及核酸染料可以检测细胞群体的DNA含量，计算一个细胞周期中各个时期细胞所占的比例，并可以得到细胞群的增殖系数。DNA非整倍体的出现可能是癌变的一个重要标志，细胞的增殖能力（S%）大小也可反映肿瘤的生物学特征，而且可用流式进行DNA检测的样本不仅可以是外周血、骨髓、实体组织，还可以是各种洗脱液、灌洗液，这对于肿瘤的诊断与随访提供了便利。在病理组织学分级，临床分期等指标基础上，肿瘤DNA倍体可更客观的预测预后。通常，异倍体肿瘤恶性度、复发率、转移率、死亡率都较二倍体肿瘤高。DNA倍体与预后密切的肿瘤：膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌、内膜癌及皮肤黑色素瘤。在乳腺、结肠、直肠、膀胱、前列腺肿瘤中异倍体和/或较高的S期百分比都是不良预后的标志。2.进行疗效评价FCM DNA直方图变化分析，可准确测定DNA合成速率，动态观察肿瘤生长状态，因此可根据细胞周期各时期分布情况，研究化疗药物作用机制，快速直观了解化疗药物对癌细胞动力学的干扰和影响。如淋巴肉瘤化疗过程中DNA直方图的变化：化疗前以异倍体为主的直方图；化疗7天后，异倍体峰位降低；14天后，异倍体峰基本消失；21天后完全消失。3.进行细胞凋亡的检测临床上治疗肿瘤的大多数抗癌药物都可不同程度地诱导肿瘤细胞的凋亡，诱导细胞的凋亡可能是决定化疗效果的重要因素。流式细胞仪为测定细胞凋亡提供了新手段，它可以从不同的角度，不同的层次准确定量凋亡从而为临床治疗提供依据。4. 进行肿瘤化疗中多药耐药基因检测（P-170、PgP、LRP等）为临床预后、治疗提供依据。（三）白血病与淋巴瘤的免疫分型近年来白血病/淋巴瘤的免疫分型已成为诊断血液系统恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。早年曾使用的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。国际上公认的通用方法是流式细胞术。流式细胞仪分析白血病免疫表型时，测量细胞一般在细胞之间，而且快速、特异、准确，重复性好，能区分细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断于分型、治疗方案选择于预后判断、发病机理研究等有重要价值。（四）造血干细胞检测与计数造血干细胞的移植已经越来越多地应用于治疗血液系统疾病、恶性肿瘤及一些遗传性异常病变等。对于有剂量要求的干细胞移植方案而言，精确计数干细胞显得十分重要，此重要性还体现在动员及白细胞分离过程中，如通过计数细胞水平判断动员是否成功，何时为最佳提取时间，以及提取的干细胞数量是否足够等。流式细胞仪的应用为鉴定何计数造血干细胞提供了一个快速、定量、重复性好的方法。五、阵发性睡眠性血红蛋白尿的诊断 CD59、CD55检测六、HLA-B27抗原检测HLA-B27抗原的表达与强直性脊椎炎有着高度相关性，超过90%的患者抗原表达为阳性，而强直性脊椎炎由于其症状与许多疾病相似而难以确诊，因此HLA-B27的表达是一个非常重要的诊断指标。
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& &&中心实验室检测项目&
正常参考值
收费（元）
抗凝血3ml，EDTA抗凝
CD3+：50-84%
CD19+：5-18%，CD16+56+：7-40%，CD3+CD4+：34-70%，CD3+CD8+：25-54%，CD4+CD8+：0-4%，TH/TS：0-4
了解在不同情况下体内免疫功能状态，辅助临床疾病的诊断
抗凝血3ml，EDTA抗凝
强直性脊柱炎HLA-B27的流式细胞仪分析_百度文库
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HLA-B27的流式细胞仪分析|
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流式细胞仪检测HLA-B27抗体用量的探讨
发布时间：
【题　名】流式细胞仪检测HLA-B27抗体用量的探讨
【作　者】李山 秦雪 黄军强
【机　构】广西医科大学第一附属医院临床学实验中心,南宁530021
【刊　名】广西预防医学,
2005(4): 243-244
【关键词】流式细胞仪 抗体 HLA-B27
【文　摘】目的探讨检测HLA-B27流式细胞仪抗体用量问题。方法采用三种不同标本量及抗体量的方法，用自配试剂同时检测病人HLA-B27。结果同种试剂采用不同标本及抗体用量，其结果均无显著性差异（P〉0．05）。结论同时减少单克隆抗体及标本用量并不影响实验结果，在经济不发达地区，值得推广应用。
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