RP-HPLC法测定山豆根中三叶豆紫檀苷的含量--《中药与临床》2012年01期
RP-HPLC法测定山豆根中三叶豆紫檀苷的含量
【摘要】：目的:建立RP-HPLC测定山豆根中三叶豆紫檀苷含量的方法。方法:色谱柱为Symmetry shield RP C18柱,流动相为甲醇-水(50:50),检测波长为310nm。结果:三叶豆紫檀苷在0.49～4.9μg范围内与峰面积有良好的线性关系;精密度试验相对标准偏差为1.31%;加样回收率为96.69%～98.57%;山豆根中三叶豆紫檀苷含量为0.019%。结论:本法操作简便,结果准确,可用于山豆根中三叶豆紫檀苷含量的测定。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R284【正文快照】：
山豆根为豆科槐属植物越南槐Sophora tonkinensisGagnep.的干燥根及根茎[1],主产于广西、贵州,为常用中药材。山豆根中主要含生物碱、黄酮和皂苷类成分[2]。《中国药典》(2010年版一部)以苦参碱和氧化苦参碱为对照品,氨基键合硅胶为固定相,采用高效液相色谱法对山豆根进行含
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京公网安备74号山豆根与木兰根的紫外光谱组法鉴别　
作者单位：(浙江林学院林业与生物技术学院，浙江 临安 311300)【摘要】&
　　目的建立山豆根与木兰根的紫外光谱组指纹图谱鉴别的方法，对山豆根及其伪品的紫外光谱进行测绘分析，建立一种简便、快速的山豆根与其伪品木兰根的鉴别方法。方法采用紫外光谱组法对山豆根和木兰根进行分析比较。结果山豆根的紫外吸收光谱特征λmax具有很好的重复性，特征性强，其伪品与之有明显的差异。结论该法用于鉴别山豆根具有良好的重复性及准确性，简单、方便、可靠，可作为山豆根质量控制的方法。
【关键词】& 山豆根； 木兰根； 紫外光谱组法； 鉴别
　　山豆根vietnamese sophora root，为双子叶植物豆科越南槐sophora tonkinensis gagnep.的干燥根及根茎［1］， 主要分布于广西和贵州等省。根茎主含生物碱，如山豆根碱(dauricine)、苦参碱（matrine）、氧化苦参碱（oxymatrine）等，具有清火、解毒、消肿、止痛、抗炎、保肝、平喘解痉之功效［2］。木兰根magnolia grandiflora root，豆科植物木兰属多种植物的根及根茎。因上述二者外形相似，用传统的显微镜检、理化分析等方法鉴别存在一定的局限性，一般很难将其区别。 而紫外光谱组法作为中药鉴别的辅助手段近年来发展较快，比其他现代分析技术更简单方便，有成本低、操作便捷等特点［3］。本实验采用紫外光谱组的方法［4］，利用6种不同极性的溶剂对山豆根及其伪品木兰根进行提取分析，建立山豆根与伪品木兰根的紫外光谱组指纹图谱鉴别的方法［5］。现报道如下。
　　1&& 仪器与样品
　　1.1&& 仪器与试剂日本岛津uv2500型紫外可见分光光度计，波长范围200～400 nm；狭缝1 nm；扫描速度medium。蒸馏水、95%乙醇、醋酸乙酯、氯仿、正己烷、石油醚，后者为分析纯（ar）试剂。
　　1.2&& 样品山豆根对照药材（购于中国药品生物制品检定所）；木兰根购于安徽亳州药市，由浙江林学院林业与生物技术学院楼炉焕教授鉴定。
　　2&& 方法
　　把山豆根药材和木兰根材料分别研成细粉。准确称取6份0.10 g山豆根粉末于6个锥形瓶中。分别加入蒸馏水、95%乙醇、醋酸乙酯、氯仿、正己烷、石油醚6种不同极性的溶剂各10 ml，超声提取20 min后，将上清液过滤移入10 ml容量瓶，定容至10 ml，摇匀，得6种溶剂的提取液。将上述各6种提取液分别取3 ml稀释至10 ml。以相应溶剂为空白，在200～450 nm紫外波长范围内扫描,每份样品至少扫描2次。
　　3&& 结果
　　各溶剂紫外光谱谱线组的光谱特征数据见图1～8 。
　　由图1可以看出，药材山豆根不同极性溶剂提取液的紫外吸收光谱具有明显的不同，其中山豆根的醋酸乙酯提取液的紫外吸光度最大，而极性最小的石油醚和正己烷提取液的紫外吸光度最小，而且其6种不同极性溶剂提取液的紫外吸收大都集中于波长250～350 nm之间。
　　由图2可以看出，伪品木兰根的不同极性溶剂提取液的紫外吸收光谱也具有明显的不同，其中木兰根的蒸馏水提取液的紫外吸光度最大，醋酸乙酯提取液的紫外吸收次之，而石油醚和正己烷提取液的紫外吸光度也最小，其中正己烷提取液的紫外吸收较石油醚小，与山豆根情况相反。
　　图1& 山豆根6种溶剂紫外光谱图（略）&&&
　　图2& 木兰根6种溶剂紫外光谱图（略）&
　　图3& 山豆根、木兰根石油醚提取液紫外光谱图 （略）&&&&&
　　图4& 山豆根、木兰根正烷提取液紫外光谱图（略）&
摘自：　　
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山豆根栽培方法
用种子繁殖，因发芽力低，生长较慢，要注意遮荫及防寒。
一、种植制度
胡豆莲忌重茬和迎茬，重茬：连作；迎茬：隔季种植，最好与其他作物轮作，胡豆莲与玉米间作。
二、土壤准备 深耕或深松，细致整地，蓄水保墒，改善耕层通气条件，有利胡豆莲根瘤发育
胡豆莲需排水良好，土壤深厚，并富含有机质的中性或微酸性土壤
适宜的土壤pH值为6.5-7.0，酸性土壤对胡豆莲根瘤菌的发育不利。
三、播种 （一） 种子准备
选用高质量种子，根瘤菌拌种（根瘤菌剂0.25克/亩）。药剂拌种以防根腐病。
（二） 播期
根据品种类型，种植制度，气候条件等灵活掌握，春胡豆莲：5-10cm地温稳定通过8-10℃即可播种.华北一般在4月下至5月上。其它胡豆莲：温度不是主要因素，应当尽早播种。
（三） 合理密植
1、合理密植原则
肥田宜稀，瘦田宜密；晚熟品种宜稀，早熟品种宜密；开张型品种宜稀，收敛型品种宜密；早播宜稀，晚播（夏播）宜密；高温区宜稀，低温区宜密。
2、适宜种植密度
华北地区，适宜稀植的1万-1.5万株/亩；适宜密植的2万-3万株/亩。
四、施肥 （一） 需肥规律
胡豆莲是需肥较多的作物，每生产100千克胡豆莲种子，需吸收纯氮6.5千克，有效磷1.5千克，有效钾3.2千克
三者比例大致为4：1：2，高于水稻，小麦，玉米；根瘤菌只能固定氮素，但供给胡豆莲的氮也仅占胡豆莲需氮总量的25%-60%，还必须施用一定数量的氮，磷和钾肥，才能满足其正常生长发育的需求对钼反应敏。
2、需肥时期
胡豆莲自身有固氮作用，胡豆莲生长发育所需肥料由根瘤菌供给和从土壤中吸收，苗期需要氮素比较少，但容易脱肥，固氮作用高峰集中于开花至鼓粒期，开花前和鼓粒后期固氮能力均较弱。开花至鼓粒期是胡豆莲吸收养分最多的时期，开花前和鼓粒后吸收养分较少。
（二） 合理施肥
一般每亩施用N5-7公斤，磷肥20-25公斤，钾肥5-10公斤，钼肥（钼酸铵）20-30克。
2、施肥时期
以农家肥为主，全部磷肥，钾肥，多施有机肥：用较多的有机肥作底肥，不仅有利于胡豆莲生长发育，而且有利于根瘤菌的繁殖和根瘤的形成，增强固氮能力，麦茬直播夏胡豆莲由于播种时间紧，来不及整地施基肥，应强调前茬小麦田多施有机肥，培肥地力，一般地块每亩可施尿素5千克或碳酸氢铵15千克，过磷酸钙15-20千克或磷酸二铵8-10千克，高肥田可少施或不施氮肥。
薄地用少量氮肥作种肥效果更好，种肥用量要少，肥种与种子隔离，以免烧种；
一般地块种肥每亩施尿素3-5千克，同时配施10-15千克过磷酸钙为宜，或每亩施尿素2-3千克加磷酸二铵3千克
钼肥可拌种。
胡豆莲需氮素虽多，但由于其自身具有固氮能力，因此需要施用的氮肥并不太多，中等以下肥力田块，适时适量施用氮肥有较好的增产效果，肥力较高的田块则不明显，施用过多不仅浪费，而且还会造成减产，关键是分枝期到开花初期，一般施用尿素3-5公斤，肥地此肥可不施。
(4) 根外追肥
进入花荚期是需要各种营养元素最多的时期，而鼓粒期后植株系开始衰老，吸收能力下降，胡豆莲常因缺肥而造成早衰减产，一般每亩可用磷酸二铵1千克或尿素0.5-1千克，加硼砂100克，对水50-60千克；
晴天傍晚喷施，喷施部位以叶片背面为好，开花期可用10-12克钼酸铵兑水50-60斤喷施，从结荚开始每隔7-10天喷1次，连喷2-3次，结合根外喷肥，在肥液中加入适当品种和适量的植物生长调节剂。
五、灌溉 耗水规律
胡豆莲需水较多，每形成1g干物质需水700g左右，蒸腾系数为300-1000，苗期比较耐旱，早熟品种根系不发达，植株矮小，受干旱影响减产严重，生育期较长的中，晚熟品种根系较发达，受旱害较轻，小粒品种受旱对产量影响较小，播种-出苗耗水量占5%，出苗-分枝耗水量占13%，分枝-开花耗水量占17%，开花-鼓粒耗水量占45%，鼓粒-成熟耗水量占20%，从始花到盛花期，植株生长快，需水量逐渐增大，为水分敏感期。
六、田间管理 （一）间苗，定苗：第一片复片展开时进行，间苗，定苗一次完成。确保密度
（二） 中耕除草：一般进行2-3 次。
（三） 化学除草：可用化学除草剂进行防除，特别注意除草剂的类型，有些防除禾本科杂草的除草剂施用后，可能对下茬谷类作物有影响，防除阔叶杂草时应当注意对胡豆莲的危害。
（四） 胡豆莲生长调节剂：2，3，5，&三碘苯甲酸（TIBA）：抑制营养生长，矮化秸秆，增花增粒，促进早熟，增产灵（4&三碘苯氧乙酸）：促进生长发育，矮壮素（2&氯乙基三甲基氯化铵）：节间缩短，秸秆粗壮，防止倒伏。
荚果成熟时间差异较常，收获过晚，一部分荚果开裂，造成产量损失，收获过早，未成熟荚果比例大，产量降低
一般在80%-90%左右叶片落完时收获，可人工收获或机械收获，胡豆莲黄熟末期为适收期，当种子含水量达到13%时可以入库。
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军撒旦广泛上轨道副教授感到风格反光镜大使馆副教授的圣诞节国防军山豆根法 世界观副教授国防军上 时光副教授国防军时光三季稻国防军告诉风格删节号反光镜撒国防军所以风格速度光辐射的撒发生于是地方税不上轨道覆盖撒旦犯得上 按时国防军
与撒辜负古生物伏特上三季稻副食噶看法 奥斯忒辜负个撒 养分下水道发射点谈话塞袄撒反对萨他
爱护高度压缩 阿姨头发电压恢复多哈按时反对法
【药 名】：山豆根
【拼 音】：SHANDOUGEN
【英文名】：Vietnamese Sophora Root
【来 源】：为双子叶植物药豆科植物越南槐的干燥根及根茎。
【功 效】：清火，解毒，消肿，止痛。
【主 治】：治喉痈，喉风，喉痹，牙龈肿痛，喘满热咳，黄疸，下痢，痔疾，热肿，秃疮，疥癣，蛇、虫、犬咬伤。
【性味归经】：苦，寒。①《开宝本草》：“味甘，寒，无毒。”②《梦溪笔谈·药议》：“味极苦。”③ 《本草正》：“味大苦，大寒。”
《要药分剂》：“入心、肺、大肠三经。”
【用法用量】：内服：煎汤，3～5钱；或磨汁。外用：含漱或捣敷。
【用药忌宜】：脾胃虚寒泄泻者忌服。①《本草经疏》：“虚寒者勿服。”②《本草汇》：“脾虚食少而泻者，切勿沾唇。”③《得配本草》：“虚火炎肺、咽喉肿痛者禁用。”
【别 名】：山大豆根、黄结（《经验方》）、苦豆根（《中药材手册》）。原植物广豆根又名：柔枝槐
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【处方名】：豆根、山豆根、广豆根、南豆根、北豆根、苦豆根等
【商品名】：山豆根：又名广豆根、南豆根。为植物柔枝槐的根。质量好，产量高，全国销售并且出口，为山豆根之正品。以质坚、干燥、无须根、无泥土等杂质者为佳。
北豆根：又名蝙蝠葛根、蝙蝠藤根、狗葡萄根、磨石头根、黄条香根、黄根、山豆秧根、山地瓜秧根、山花子根、光光叶根。为防己科植物蝙蝠葛Menispermum dahuricum DC.的根茎。为北方所习用。
土豆根：为豆科植物华东木蓝、多花木蓝、宜昌木蓝、苏木蓝、陕西木蓝以及花木蓝等的根及根茎。
云豆根：为豆科植物野豇豆等的根。为云南地区所习用。
后三种均非正品，仅在个别地区使用。
【动植物资源分布】：分布我国南部。主产广西。
【药材的采收与储藏】：4～5月或8～9月间采挖，除去茎叶及须根，洗净，晒干。
【拉丁名】：药材Radix Sophorae Tonkinensis原植物广豆根Sophora
subprostrata
【炮制方法】：拣净杂质，粗细分档，用水浸泡，捞出，润透后切片，晒干。
【考 证】：出自《开宝本草》。
【生药材鉴定】:干燥根呈不规则的结节状,顶端常残留茎基或茎痕,其下着生数条根。根为长圆柱形,有时分枝,略弯曲,长10~20~35厘米,直径0.3~1厘米;表面棕色至黑棕色,有纵皱纹及横长略突起的皮孔。质硬难折断,断面略平坦、浅棕色,并可见环状形成层,中心无髓。气微弱,味极苦。以粗壮块大、粉多者为佳。主产广西。商品山豆根,除上述主要的广豆根外,应用较广的尚有下列数种:①北豆根为防己科植物蝙蝠葛Menispermumdauric-umDC.的根茎,使用于东北、华北及山西、山东、青海、甘肃等地(参见“蝙蝠葛”及“蝙蝠葛根”条)。②土豆根为豆科植物华东木蓝IndigoferafortuneiCraib、多花木蓝I.AmblyanthaCraib、宜昌木蓝I.Ichan-gensisCraib、苏木蓝I.CarlesiiCraib、陕西木蓝I.potaniniiCraib、花木蓝 Palib.的根及根茎,使用于江苏、湖北、河南、甘肃、陕西等地。药材性状:根头部呈不规则块状,上端常残留茎基或茎痕,其下有根数条。根呈长圆柱形，有时分歧，略弯曲，长15～50厘米，直径4～10 毫米，表面灰黄色或黄棕色，有横长的皮孔及纵皱纹，偶有横裂，有时栓皮呈鳞片状剥落。质坚硬，难折断，断面黄白色或淡黄色，皮部纤维状，中心无髓。气微弱，味苦。③云豆根
为豆科植物卷圈野扁豆Dunbaria circinalis（Benth.
）Bak．的根和毛莨科植物单叶升麻 Beesia calthae-folia （Maxim.
）Ulbr.的根茎，使用于云南地区。显微鉴定： 根横切面：木栓层为数列木栓细胞，排列整齐。皮层窄，细胞切向延长，有的含草酸钙方晶；含晶细胞较周围薄壁细胞小，可见2-4个含晶细胞呈切向相聚。韧皮部宽广；韧皮纤维多成束或单个散在，有的纤维束周围细胞含方晶，形成晶纤维；筛管群于韧皮部内侧较明显；韧皮射线明显。形成层成环。木质部较韧皮部稍窄；木射线宽1-多列细胞，细胞壁稍厚，具纹孔；导管多个相聚单个散在，常含黄棕色树脂块，其周围有木纤维束。粉末：淡黄色或黄棕色。①纤维及晶纤维及晶纤维无色或黄棕色。纤维细长，常扭曲，直径 11-31μm，少数膨大约至54μm，壁极厚，非木化，初生壁与次生壁易分离，表面有纵裂纹。晶纤维的含晶细胞壁不均匀木化增厚。②含晶厚壁细胞类圆形、类长方形或不规则形，壁极厚，木化，内含草酸钙方晶，有的细胞分隔，含2-3个方晶。③草酸钙方晶类方形、菱形或多面形，直径9-33μm，长18-37μm。此外，有少数石细胞、网纹及具缘纹孔导管、木栓细胞、淀粉粒等。
【中药化学成分】：根含总生物碱约0.93%，其中苦参碱(matrine)0.52%，氧化苦参碱(oxyma-trine)0.35%, 以及微量的臭豆碱(anagyrine)和甲基金雀花碱(methylcytisne)；并含槐果碱 (sophocarpine)。黄酮类化合物有紫檀素(pterocarpin)和l-三叶豆高丽槐甙(l-trifolirhizin,l- maackioin-β-D-glucoside),后者经酶水解得l-高丽槐素（l-maackiain）,均为紫檀素类化合物，有抗癌作用，其作用甙比甙元强，右旋体比左旋体强。另含山豆根素(sophoranone)、山豆根查耳酮(sophoradin)、山豆根色烯素 (sophoranochromene)、山豆根色烯查耳酮(sophoradochromene)、山豆根色烯素 (sophoranochromene)、山豆根色烯查耳酮(sophoradochromene)、山豆根色满素（2-[{3′- hydroxy-2′,2′-dimethyl-8′-(3-methy-2-butenyl)}chroman-6′-yl]-7-hydroxy-8-(3- methyl-2-butenyl)chroman-4-one）、山豆根苯并二氢呋喃素(2-[{2′-(l-hydroxy-l- methylethyl)-7′-(3-methyl-2-butenyl)-2′,3′-dihydrobenzofuran}-5′-yl]-7- hydroxy-8-(3-methyl-2-butenyl)chroman-4-one)、大豆素（daiazein）、山豆根苯并吡喃素（2-[(7′-hydroxy-2′-dimethyl-2H-benzopyran)-6′-yl]-7-hydroxy-8-(3-methyl-2- butenyl)chroman-4-one）、4′，7-二羟基-6,8-双（3-甲基-2-丁烯）二氢黄酮（4′,7- trihydroxy-6,8-bis-(3-methyl-2-butenyl)flavanone）、2′,4′，7-三羟基-6,8-双（3- 甲基-2-丁烯）二氢黄酮（2′,4′,7-trihydroxy-6,8-bis-(3-methyl-2- butenyl)flavanone）、山豆根新色烯查耳酮（6-[3-(2′，4′- dihydroxyphenyl)acryloyl]-7-hydroxy-2,2-dimethyl-8-(3-methyl-2-butenyl)2H- benzopyrane）、山豆根新色烯素(2-(2′，4′-dihydroxyphenyl)-8,8-dimethyl-10-(3- methyl-2-butenyl)-8H-pyreano[2,3-d]chroman-4-one）及柒料木素；其所含酚性物质，水解得咖啡酸和长链醇（CnH2n+1OH，n=20,21,23,24,25,26）其中以C26为主，占72.4%；此外，尚含羽扇豆醇、β-谷甾醇、维生素C和维生素B1。有报道，中性多糖由D-半乳糖和D-葡萄糖组成，其分子比为1:1。
【中药化学鉴定】：（1）用10%氢氧化钠液滴于药材表面，颜色由橙红色变为血红色，久置不褪色。（色素反应）
（2）取本品粉末0.5g，加70%乙醇10ml，置水浴上加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加1%盐酸溶液5ml溶解，滤过，滤液分置两支试管中，并分别滴加：①改良碘化铋钾试液，产生红棕色沉淀；②碘化汞钾试液，发生黄白色沉淀。（检查生物碱）
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