做ELISA时如何包被双抗体夹心elisa或者抗原?

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最近园子里有很多战友问我有关在单抗制作中,如何利用ELISA筛选以及ELISA方法操作的注意事项,下面我先起个头吧,谈谈我的个人经验:)ELISA,全称酶联免疫吸附实验,主要利用的是抗原抗体特异性结合的特点,可分为直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法等。下面以间接法为例进行介绍:1、方阵ELISA。用途:①融合前后确定鼠血清中抗体效价;②拿到单抗腹水后,需要建立ELISA方法时首先要确定包被原及抗体的最佳工作浓度。经典的方阵ELISA:将抗原和抗体各自稀释成不同梯度浓度,结果OD值P/N&2的均判为阳性,选取OD值在1.0左右的那个Ag-Ab浓度为最佳工作浓度,其主要原因与酶标仪灵敏度有关。但是,对于抗原抗体而言,由于它们被稀释成不同浓度,那么在理论上,每个抗原稀释度情况下,总有一个抗体的稀释度其OD值在1.0左右,那么到底选取哪一个OD值1.0左右的好呢?这就需要同时用药物做个抑制来看,哪个浓度下抑制情况好,就取哪个抗原抗体浓度做工作浓度。相关链接:2、间接竞争ELISA:在用方阵ELISA确定好抗原抗体最佳结合浓度后就可以做间接竞争ELISA了,其目的主要是考察抗体的特异性、绘制标准曲线,计算抗体对抗原的半数抑制、检测限等参数,也可以用来检测未知样品中的抗体。方法是用确定的抗原包被,在加一抗时同时加入不同浓度的标准品(一般是药物),然后加二抗,显色。用药物(即标准品)浓度的对数为横坐标、抑制率为纵坐标,绘制ELISA标准曲线,计算相关的参数,之后就可以将未知的样品所测OD值代入曲线方程求其中抗体的含量。通常这是建立ELISA检测方法的必备项目。标准曲线可以绘成直线或是曲线(二次方程或三次方程)。通常是选取线性比较好的几个点绘成直线。直线斜率越高说明抗体的特异性及灵敏性好,R2值越靠近1,则说明线性关系好。曲线绘好后,有一些常用的参数,如抑制率、半数抑制、检测限、定量限、标准偏差、变异系数等等:抑制率(%)=1-B/B0(B0为不含药物的OD值;B为含有药物的OD值)标准差(SD)=[&(Xi-B ) 2 / (n-1)] 1/2;标准偏差(RSD)=SD/B
编辑: ludongcn
作者:口口草芳
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用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时,固相载体的包被物是A.酶标记A抗体B.未标记的抗A抗体C.未标记
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用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时,固相载体的包被物是A.酶标记A抗体B.未标记的抗A抗体C.未标记抗原AD.酶标抗球蛋白抗体E.酶标记抗原A请帮忙给出正确答案和分析,谢谢!
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请先输入下方的验证码查看最佳答案我是做ELISA实验的初学者,最近在建立双抗体夹心法的检测方法,不知道如何确定包被浓度和抗原浓度,_作业帮
我是做ELISA实验的初学者,最近在建立双抗体夹心法的检测方法,不知道如何确定包被浓度和抗原浓度,
我是做ELISA实验的初学者,最近在建立双抗体夹心法的检测方法,不知道如何确定包被浓度和抗原浓度,
你是不知道包被的浓度还是不知道怎样配治包被液啊?我这里有份ELISA的实验过程.不过是除掉前两部的.1、 加被检抗原(重组蛋白或自然样品):用稀释液(DS01、AS01、AS02、AS03、AS04)将被检抗原按实验设计稀释,每孔100&l,同时用稀释液作空白对照.封板膜封板,室温放置两小时.2、 洗涤:到尽板孔中的液体,加满洗涤液(WS03),静止放十秒,洗四次,最后在毛巾或吸水纸上拍干板子:3、 加检测抗体:将生物素标记的检测抗体稀释适当浓度(稀释液DS01),每孔100 &l封板膜封板,室温放置一小时:4、 洗涤:到尽板孔中的液体,加满洗涤液(WS03),静止放十秒,洗四次,最后在毛巾或吸水纸上拍干板子:5、 加亲和素-辣根过氧化酶(HRP)稀释适当浓度(稀释液HD01)每孔100&l,封板膜封板,室温放置30分钟:6、 加底物:新鲜配制的四甲基联苯胺溶液(TMB),每孔100&l,室温暗处放置30分钟:7、 加终止液(SS01):每孔100&l,立即读值:8、 观察结果:用酶标仪记录450nm读数.百度拇指医生
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请教前辈们,ELISA实验中包被抗原,包被抗体是什么意思啊?以及如何包被的呢?恳请高手给予指点,感激不尽啦!
提问者: [] [] []
秀友回答 (3)
包被抗体就是你买过来的板子中已经被包在96孔板里面的抗体,包被抗原就是你要检测的东西,加到96孔板中就被称作包被抗原了
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抗原就是能引发免疫反应的分子。一般是把抗体或是抗原与96孔板孵育过夜,PBST洗涤,再用BSA封闭,这个过程就是包被了。然后再加入抗原,酶标抗体,加入底物显色,检测其吸光度,根据标准曲线就可以检测其含量了
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包被就是吸附,固定
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