请问血清在-80°C能放多久？冻存了1年的标本可以用来检测雌激素吗？用什么方法测？需要多少样本量？_百度知道
请问血清在-80°C能放多久？冻存了1年的标本可以用来检测雌激素吗？用什么方法测？需要多少样本量？
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应该可以 至于用什么方法和用量问你师兄师姐去。。。好歹也是北医的啊。。。
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出门在外也不愁生化检验中标本溶血对结果的影响及对策
日期:来源:未知作者:黄琛 点击:次
  
【摘要】& 目的：探讨标本溶血对生化检验结果的影响。方法：抽取我院50例体检者血液标本5 mL，分别置于2支试管中，每支2.5 mL，其中1支试管中的标本采用人工方法使其溶血，检测正常标本和溶血标本血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、葡萄糖(GLU)、血尿酸(UA)、钾离子(K+)等11项临床生化检验指标的含量并进行比较。结果：溶血血清ALT、AST、LDH、K+ 、CHOL测定结果明显高于正常血清(P&0.05)， ALP的活性随溶血而降低，溶血对BUN、Cr、TG、GLU、UA测定结果影响较小。结论：临床检验工作中应采取一切可能的措施避免标本溶血的发生，如发生了标本溶血现象，可设置样品空白以减少影响，必要时应重新采血。
【关键词】& 溶血 ; 生化检验 ;对策
&&&&&&　[ABSTRACT] Objective: To investigate the influence of sample hemolysis on the outcome in biochemical test and countermeasure. Methods: Blood samples of 50 subjects undergoing examination of health screening were taken, 5 mL each one, and each sample was placed in two test tubes respectively, 2.5 mL artificial methods were used to make one of the paired samples hemolysis, and all samples were tested for ALT, AST, LDH, ALP, CHOL, TG, BUN, Cr, GLU, UA, K+, the contents of them were compared. Results: The contents of serum ALT, AST, LDH, K+, CHOL in hemolytic samples were significantly higher than that in normal samples (P&0.05), activity of ALP decreased with hemolysis, determination of BUN, Cr, TG, GLU, UA changed little between hemolytic and normal samples. Conclusion: All possible measures should be taken to prevent samples hemolysis, if sample hemolysis occurs, blank sample should be set as control to reduce the errors, resampling may be done in necessary.　[KEY WORDS] H B Countermeasures　基层检验工作中，由于采血不当、试管不洁、检验过程中未按操作规范进行操作等原因，均可引起不同程度的标本溶血，而标本溶血又成为日常检验工作中最常见的影响生化检验结果的原因。除此之外，反应时间和温度也可影响临床生化检验指标的测定[1]。本文结合有关溶血对部分临床生化检验指标测定的影响，分析了溶血原因及其对策。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　抽取我院体检者50例血液5mL，分别置于2支试管中，每支2.5 mL，其中1支室温自然分离，30 min后以1 200 r/min 离心10 min分离血清，取1 mL血清作为正常血清备用;另1支试管中的标本采用人工方法使其溶血[1],然后以相同条件离心，分离溶血血清后备用。
　　1.2 方法
　　采用7020生化分析仪(日立公司)和国产科华东菱试剂测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、血尿酸(UA)等10项指标水平，操作方法和步骤均按试剂盒说明书规定进行;采用迅达903电解质分析仪及其配套试剂测定K+，每份正常血清和溶血血清共进行10次测定，取均值，分别计算50例标本各指标的测定均值，得到正常标本的测定均值()及溶血标本的测定均值(1)，并对测定结果进行对比观察。
　　1.3 统计学处理
　　计量资料的比较采用t检验，检验水准&=0.05。
　　2 结果
　　溶血血清ALT、AST、LDH、K+ 、CHOL测定结果明显高于正常血清(P&0.05)， ALP的活性随溶血而降低(P&0.05)，溶血对BUN、Cr、TG、GLU、UA测定结果影响较小，正常血清与溶血血清差异无统计学意义(P&0.05)(表1)。表1 溶血血清与正常血清各生化指标测定　结果比较注：与正常血清标本比较，*P&0.05。
　　3 讨论
　　溶血分为体外溶血和体内溶血，体外溶血可有物理因素(如机械性破坏、冰冻)、化学因素(如血样接触活性剂)和代谢性因素(如遗传性疾病引起的血细胞脆性增加)引起，体内溶血则可有物理因素(如人工心脏瓣膜或大血管手术后)、生物因素(如疟疾)和药物毒性反应、配血不合引起的输血反应等因素[2]引起。然而细胞内液中某些物质如LDH、ALT、ALP、AST、K+等的含量是细胞外液中浓度的22～160倍，只要轻微溶血就会造成检验结果明显的变化，另外，血红蛋白可干扰胆固醇的酶法测定[3]。本实验结果表明，标本溶血后酶浓度的变化极为显著，酶对标本的要求比其它生化检验项目的要求都要高，因此在日常工作中标本溶血后不适宜再对酶类进行测定。另外血清K+受溶血后影响较大，CHOL其次，而溶血对蛋白类、Na+、Cl、Ca2+、TG、GLU、BUN、Cr、UA等的影响十分有限。
　　体外溶血可通过样品制备技术的标准化加以克服，在采血过程中严格按照操作技术规范执行，采血器具应保持清洁和干净，注射器针头不能用酒精消毒，因酒精可致溶血;止血带不宜扎得过紧过久，进针出现回血后注射器活塞不宜过快拔出;血液注入试管不宜过快，以免血泡过多引起血细胞破裂;血液标本采取后尽可能早的使血清分离出来，一般应于采血后室温放置30～60 min内分离血清;标本离心前应自行凝集，不用器物等剥离血块;标本离心控制在 1 000～1 200 r/min，离心5～10血液不可存放于冰箱冷冻室，避免融化后引起溶血;血液放置时间不宜过长，防止消毒液或其他物质滴入标本，溶血将影响检验结果;在条件允许的情况下，溶血标本应要求重新采集，以便提高检验结果的准确性[4]。另外，目前各大医院都逐渐应用真空管进行采血，这也尽可能地减少了标本溶血的机会。另一方面，从方法学上克服和减少溶血的影响也是重要的，对于溶血后血红蛋白对光度比色的影响可通过设置样品空白等措施加以克服，以提高临床生化检验的准确性和可靠性。
【参考文献】
& 1 刘波,范建. 标本溶血对常规生化检验项目的影响[J].邯郸医学高等专校学报，)：6364 .
　　2 沈伽弟.溶血对临床生化检验的干扰和影响[J].中华医学检验杂志,):250251 .
　　3 符贻峰. 溶血、黄疸、脂浊、样本对生化项目结果干扰的探讨[J].海南医学，)：652.
　　4 吴立翔，林一民.溶血对干化学生化检验结果的影响[J].第三军医大学学报,):546.
(责任编辑：竹)
    
       
    
        
         
   
       
     糖化血红蛋白检测仪的解决方案_标本_中国百科网
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糖化血红蛋白检测仪的解决方案
    摘要:由中兴科仪（北京）贸易有限公司主营经销的挪威小旋风糖化血红蛋白检测仪在使用过程中偶尔会产生一点点儿小故障， 以下是我们对遇到的常见故障的排除方法与总结，提供给大家以供帮助和参考。
1、开机后屏幕出现&ERROR，READUSTING&自动定标不能完成，按任何键关机，仪器不能进入测试程序如何处理？
这是由于测定笔圈使用时间过长，产生漏光所致，更换检测笔的笔尖笔圈后，进入&options&菜单下的 &New White&程序，反复检测三至五次，通常即可解决。
2、屏幕持续出现&Battery low&的提示如何解决？
这是电力不足的提示：可插上充电器进行充电，但不要长期充电。
查看充电线路是否通畅；打开仪器后盖板，观察电池是否完好，连接是否正常，必要时更换新的充电电池（2A，1.2V充电电池）
3、糖化血红蛋白仪测定试剂储存有那些要求？
未开封试剂盒于2-8℃暗处保存，避免冰冻。
试剂盒开封后,HbA1c反应板,R2洗涤液置于15-25℃保存;CRP R1、R3试剂和U-Albumin R1、R3试剂置于２－２５℃保存；
需２－８℃保存的试剂：HbA1c R1试剂，D-二聚体全套试剂，CRP、尿微反应板，尿微R2试剂和胶体金缀合物；
需平衡至室温后应用的试剂：HbA1c、D-二聚体、CRP反应板、D-二聚体全套试剂、尿微R1稀释液。
4、糖化血红蛋白仪检测的标本要求：
HbA1c：加抗凝剂或不加抗凝剂（EDTA、肝素和NAF）末梢血和静脉血均可。随时可采血、不受空腹用药影响。待测血样不溶血2-8℃可储存１０天，但不能冰冻。
D-dimer：用0.11M（即3.28％）柠檬酸钠：血为１：９进行抗凝，立即离心，１５－２０分钟，血样最长不能超过６h,小心吸取无白细胞、血小板血浆；２４小时内进行测定。亦可-20℃保存，４周内再测定须３７℃１５分钟复溶。
U-Albumin：尿液标本-20℃冰冻标本可稳定保存１２周，但不可反复冻溶。已用R１稀释的尿标本，可再冰箱或室温（２-25℃）稳定保存１４天。
CRP：全血（含抗凝剂）或血清、血浆2-8℃可保存３天。血清或血浆-20℃冰冻保存可使检测结果相对稳定。但是已用R1稀释的血清标本放置时间不超过１小时，加EDTA抗凝的全血或血浆稀释标本不超过１５分钟。
5、糖化血红蛋白仪定量测定操作中共同的注意事项：
不同批号的试剂不要交叉使用。不要用吸管头或手接触滤膜，以免触破或污染。
使用吸管的每一步骤，均应更换吸管头。
加样或试剂到反应板时，吸管头应离反应孔0.5-1.0cm，垂直滴于反应孔中间，待溶液渗滤完后再加第二个试剂，操作不能停顿。
加样应避免气泡，气泡可形成白色圈影响比色。
操作步骤完成后立即用仪器测定，过时超过５分钟反应圆孔内滤膜干燥、收缩、褶皱不平，引起读数结果误差。
6、糖化血红蛋白仪四个项目的质控品：
阳性质控品：包装：1&0.5ml。纯化的CRP人血清，检测时请在CRP serum/plasma程序下进行测定。
D-dimer：质控品包装1&1ml；每瓶含量见瓶签
U-Albumin：
应用国际尿液标准CRM470（IFCC/BCR/CAP参照品）进行定标；（另配，不随试剂盒）
HbA1c：质控品由于时全血制品，不易保存不随试剂盒，需另配。
上述各项质控品含量以每批标签标注为准！
7、衡量是否是渗滤减慢首先了解加样于反应板时出现渗滤速慢的常见原因及处理？
正常时参考滤速（秒），见下表： 项目第一步第二步 第三步 第四步
HbA1c 15-20&P 10&P
CRP 30&P 30&P 20&P
D-Dimer 45&P 45&P 45&P 45&P
U-Albumin 50&P 50&P 50&P
渗滤速度减慢的常见原因：
反应板储存中受潮。
冰箱中取出反应板未平衡至室温15-25℃即开始操作。
溶血不完全。
测D-Dimer时，血浆标本离心不够，血浆中含细胞，血小板导致堵塞反应膜。
CRP测定时白细胞过高。
U-Albumin、尿中含有尿酸盐类导致堵孔，应离心去除。
8、HbA1c检测的标准化问题：
目前国际上 HbA1c检测最主要的问题就是缺乏一个能被广泛认可的标准化方案。特别是由于血红蛋白有多种变体，而目前没有给分析对象做出一个明确的定义。为了结束这种状况，国际标准化委员会（IFCC）HbA1c标准化工作明确定以[&-N-（1-脱氧果糖基）血红蛋白]作为测定的标准对象。
在没有建立一个科学、合理的参考系统之前，美国临床化学协会（AACC）糖化血红蛋白标准分会和IFCC HbA1c标准化工作组建议以美国糖尿病控制和并发症调查协会（DCCT diabetes control ａnd complication trial）研究中所用的方法作为指定的比较方法（Designated comparison method）。DCCT用Bio-Rad公司的DiamatTM HPLC作为HbA1c的测定方法，但也不是一个广泛认可的&金标准&。但目前各国生产HbA1c测定仪的实验方法，均应参照指定的比较方法。与其他型号的仪器对照，实现相对的标准化，凡仪器技术参数中标有&DCCT Standardised&，说明该仪器已参照DCCT要求。
9、屏幕显示&above/below unit&表示什么意思，如何处理？
出现上述提示表示测定标本高于/低于**单位；检测结果超出其测量范围。
各项目检测范围如下：CRP:　全血8-250mg/L，血清或血浆5-150 mg/L，高于检测范围时，可用二管稀释液或标本量减少一半结果乘以2。 D-Dimer:　0.1-20 mg/L,高于测定最高量程可用试剂盒R2洗涤液稀释标本。U-Albumin:　5-200 mg/L高于检测范围时减少标本量，用25&l尿，结果乘以2。HbA1c：3-18％，一般不用稀释，因为HbA1c18％已经相当于平均血糖水平480-500mg/dl。超过上述范围，可出现上述符号；可进行加量或稀释处理后测定。
10、HbA1c测定时屏幕显示&Hb conc too low&意义及处理：
该显示表示Hb浓度太低，样品中Hb浓度低于60克/L的范围，可用10&l全血加在各稀释管中振摇，仪器将显示正确结果。此外，Hb浓度位于正常范围，标本加于稀释管中时，未彻底振摇，血液凝固在毛细管中，亦可出现上述提示。
11、HbA1c测定时屏幕显示&Reduce Hb Conc&意义及处理：
（1）该显示表示样品中Hb浓度大于180克/L，应通过稀释降低血红蛋白的浓度。解决办法：如确定Hb过高，可用2管400&l稀释液加5&l血液或是吸2/3毛细管血加到稀释管中。
（2）此外血液在稀释液中未彻底振摇，红细胞破坏不完全，渗滤不好，染色不充分，引起反应板红色偏高。校正方法：血样加到稀释管中应彻底振摇，振幅每秒3-4次，放置2-3分钟，冬季可再适当延长。
12、部分病人血糖正常，但HbA1c结果较正常高0.1-0.6％，如何解释？
Nycocard HbA1c正常人参考值4.5-6.3％，部分病人血糖正常，而HbA1c略高于正常值0.1-0.6％的水平，这种情况可能原因是：
空腹血糖是即时指标，只能反映病人当时血糖情况，受饮食、用药、空腹时间等多种因素影响，个别糖尿病人有时亦可正常。
糖尿病的形成也是个循序渐进的过程，出现这种正常高值可能是糖尿病前期较早期的预兆。
HbA1c能反映2个月来，糖代谢的总体情况和整体观察指标，发生变化的时间及其敏感性要早于血糖。
出现上述情况，临床上虽不能诊断为糖尿病，但应提醒病人，注意饮食控制，运动并定期随访观察。
13、白细胞增高为什么会影响CRP水平？
很高的白细胞可引起溶血不完全，（包括少部分肝胆病人红细胞异常溶血不完全者）。由于标本通过滤膜时部分堵塞了细孔，反应物全滞留在表面，可以引起假阳性结果升高。稀释血清、血浆和全血一样正常滤速为20-30秒。
WBC、35&109/L，渗滤时间轻微延长，但CRP结果无意义。
建议用离心法，澄清的血清、血浆标本检测结果较全血更为满意。
14、尿微量白蛋白（U-Albumin），换算成&g/min排泄率的计算
&g/min＝（尿微浓度mg/L&尿液总量（ml）&收集总量时间（分钟）
则30&1200&（24&60）=25&g/min
15、尿微量白蛋白测定主要影响因素及处理：
尿标本预处理不好，尿酸盐等物质应在加样前离心或过滤
尿中有RBC，当血红蛋白大于0.5mg/L时，血中的人血清白蛋白引起U-Albumin的假性增高。
16、D-二聚体假性（非病理性）增高的原因及处理。
未彻底离心，血浆中含有血细胞，PLT，高脂或高粘血浆，导致渗滤不好，上述物质滞留在膜表面，可导致假阳性高值。
处理方法：4000转离心15分以上，小心吸取血浆。
文章链接：中国化工仪器网 /Tech_news/Detail/100995.html
Mail: Copyright by ；All rights reserved.ELISA定量检测结果不准确的原因，是做方法学验证 的，求高人指点！_百度拇指医生
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?ELISA定量检测结果不准确的原因，是做方法学验证 的，求高人指点！
ELISA存在的问题:1、由于ELISA所用的抗原大部分还是混合的可溶性抗原，所以对同一微生物寄生虫或其他物质不同部位的抗原还没有分开。2、内源性过氧化酶的普遍存在，如人脑组织中，呼吸道分泌物的炎症细胞中及某些病毒的组织培养中均有内源性过氧化物酶的活力，常不易除去，如果用某些方法除去时，则病毒的抗原性亦受到破坏，对于用ELISA检测不利。3、对ELISA法的非特异性评价的资料尚不够完善，因此，对出现一些非特异性反应的时候，往往不易解释。4、固相载体的质量常不统一，主要是原料及制备工艺还不一致，致使不同批号的固相载体有时本底值较高，有时吸附性能很差，影响试验结果。5、试剂不统一，现在处于“八仙过海，各显神通”，标准还不能统一。血清是最常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种：1． 内源性物质有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。（1）类风湿因子 人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。解决该情况的办法是：①用F(ab)2替代完整的IgG；②标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。（2）补体 ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 可以将二者连接起来，从而造成假阳性。解决的办法是：①用EDTA稀释标本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。（3）嗜异性抗体 人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。解决的办法是：可在标本稀释液中加入过量的动物Ig (s) ，但加入量不足或亚类不同时无效。（4）嗜靶抗原的自身抗体 抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现，解决的办法是：测定前需用理化方法将其解离后再测定。（5）医源性诱导的抗鼠Ig (s) 抗体 临床开展的用鼠源性CD3等单克隆抗体治疗，用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向治疗等新技术，均有可能使这些病人体内产生抗鼠抗体；另外，被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠Ig (s) 抗体。这些病人ELISA测定时均可产生假阳性。解决的办法是：测定抗原时，在标本中加入足量的正常鼠Ig (s) ，从而克服由于上述原因造成的假阳性。（6）交叉反应物质 类地高辛、类AFP样物质等，是与靶抗原有交叉反应的物质。在用多抗测定抗原时对测定结果影响不大，但在用单克隆抗体测定抗原时，如果交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时，也会出现假阳性结果。（7）标本中其它成分的影响 血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过大等，均对ELISA测定结果有干扰作用。2． 外源性物质外源性物质常常是由于用于ELISA测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。（1）标本溶血 由于各种人为原因引起的标本溶血，均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中，会导致非特异性显色，干扰测定结果。为克服上述干扰作用，标本采集时必须注意避免溶血。（2）标本受细菌污染 因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。（3）标本保存不当 在冰箱中保存过久的标本，血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性；标本放置时间过长（如一天以上），有时抗原或抗体免疫活性减弱，亦可出现假阴性。为克服上述干扰，ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，5天内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。（4）标本凝集不全 在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液采集后1/2~2h开始凝固，18~24h完全凝固。临床检验工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；这类情况于次日复查时因血凝已完全，血清中不再有纤维蛋白原存在，故复查结果变为阴性。为避免上述干扰作用，解决的办法最好是血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。（5）标本管中添加物质的影响 抗凝剂（如肝素，EDTA）、酶抑制剂（如NaN3可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性）及快速分离血清的分离胶等均对ELISA测定有一定干扰作用。综上所述，对临床检验ELISA测定中出现的假阳性或假阴性结果，在考虑试剂因素和操作因素之外，更多的应从标本因素方面进行分析，并应采取相应措施排除干扰作用，从而为临床提供正确可靠的检测结果。
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