鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法
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1．本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。2．实验内容或原理 某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HA)。这种红细胞凝集现象可
1．本次实验的目的和要求
掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。
2．实验内容或原理
&&& 某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HA)。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验(HI)。
3．需用的仪器或试剂等
动物 健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。
器材 高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。
药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清
4．实验步骤
(1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。
&(2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。
（3）免疫机体抗体效价的测定：
&3.鸡新城疫（ND）的HA和HI
（1）试验准备 &
&①&抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。
&②&0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。
红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。
&③&被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内(微量法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血)，在室温中静置或离心，待血清析出后使用。每只鸡应更换一个注射器，严禁交叉使用。
④&稀释液：为灭菌的生理盐水。
⑤&红细胞保存液的配制方法：葡萄糖2.05克，柠檬酸钠(SHOO)0.80克，柠檬酸(2H20)0.055克，氯化钠0.42克，蒸馏水加至100毫升。过滤分装，高压灭菌10分钟，放4℃冰箱保存。
(2)红细胞凝集试验(HA)&& 主要是测定病毒的红细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验所用病毒稀释倍数(抗原单位)。
鸡新城疫病毒的HA试验与HI试验现采用微量法，以u或v形微孔塑料板代替试管。
①&首先用移液器向每个孔加入稀释液一滴(0.05毫升)。
②&用微量移液器取病毒抗原0.05毫升，加入第一孔，反复抽动6次后，吸出0.05毫升加入第二孔，在第二孔反复抽动6次后，吸出0.05毫升加入第三孔，如此连续稀释至第十一孔后吸出0.05毫升弃去。第12孔不加病毒液为红细胞空白对照。
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广东地市：
无论是大妈广场舞愈演愈烈的矛盾，还是照妖镜之类的隔空斗法，都凸显了基层组织的缺位。 []
鸡场鸡新城疫免疫抗体水平抽检分析
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　　本试验的主要目的在于了解新城疫疫苗正常免疫注射情况下，新城疫疫苗对鸡新城疫的控制效果，为今后作好鸡新城疫的防治工作提供借鉴和参考。
　　&nbsp1、材料
　　&nbsp1.1样品来源
在茂名市畜禽养殖区的10个鸡场进行随机调查，每个鸡场按照10%的比例随机抽取免疫过新城疫疫苗的存栏鸡血清样品4000份。
　　&nbsp1.2试验方法 血凝（HA）和血 凝 抑 制（HI）试 验 ， 按
照《GB新城疫检疫技术规范》进行操作。
　　&nbsp1.3主要试剂 新城疫抗原、新城疫阳性血清、阴性血清等诊断试剂均由中国兽药药品监察所提供。
　　&nbsp2、方法
　　&nbsp2.1 血样采 集 翅下
静脉采血，每只鸡采血2ML，分别标记密封，静置半小时，待血清析出后，收集后集中带回实验室处理。
　　&nbsp2.2新城疫抗体效价分布情况
　　按照HI抗体水平低于5㏒ 2时保护力很差，容易感染新城疫病毒而发病的基本理论，本实验把HI抗体水平5㏒
2作为来评价免疫效果分界点，当鸡HI抗体水平低于5㏒ 2时，免疫效力低下，判断为免疫不合格；当HI抗体水平高于5㏒
2时，免疫效力良好，判断为免疫合格。
　　&nbsp3、结果
　　&nbsp3.1通过对10个鸡场的抽样分析，每个鸡场（鸡场编号分别为1~10）的新城疫疫苗免疫接种情况都是按现阶段正常免疫程序进行，并且免疫密度都达到了100%。
　　&nbsp3.2新城疫免疫质量：结果表明，鸡场3的免疫合格率达到100%，鸡场7的免疫合格率只有46.5%
，平均免疫合格率仅为64.5%，没有达到理想的免疫效果。
　　&nbsp4、讨论
　　分析检测结果，发现这些鸡场鸡新城疫抗体水平不高，注射的疫苗没有达到理
想的保护效果，存在发生鸡新城疫的隐患。分析原因如下：（1）疫苗来源。在免疫过程中，疫苗质量是免疫成败的关键。伪劣疫苗不但达不到免疫力效果，反而影响免疫程序，甚至导致机体发病，因此要选用正规厂家和正规渠道购买的疫苗。（2）在疫苗保存方面，冻干苗要求在-15℃以下冷冻保存，温度越低则保存时间越长，而油乳剂疫苗则需要在2-8℃保存。在实践中往往忽视了疫苗保存温度与免疫效果之间的关系，尤其是稀释后的疫苗在常温下放置时间越长，免疫所产生的效价也就降低，免疫效果也越差。（3）疫苗在运输过程中，运输时间越长、周转次数越多，疫苗质量越难以保障。在运输中，应尽量避免高温、阳光直射，应用专用冷藏车运输，运输过程中减少疫苗周转次数。（4）在免疫过程中，质量是免疫成败的关键，使用了伪劣的疫苗不但起不到免疫力效果，反而影响免疫程序，因此要选用正规厂家和正规渠道购买的，再有正确处理好剩余疫苗及容器，以防污染环境造成免疫失败。（5）在免疫过程中，免疫注射的方式方法也是免疫成功的关键。此外，防疫苗污染造成免疫失败。
　　&nbsp5、建议
　　&nbsp5.1实施科学的免疫程序：
　　&nbsp5.1.1 一、种鸡、蛋鸡
　　初免：7日龄，新城疫-传支（120）二联苗每只鸡滴鼻1~2滴，同时新城疫灭活疫苗每只鸡颈部皮下注射0.3ml。
　　二免：60日龄，用新城疫I系弱毒活疫苗或新城疫灭活苗肌肉注射0.5ml。
　　加强免疫：120日龄，新城疫灭活疫苗颈部皮下0.5ml。开产后，根据免疫抗体检测情况，3-4个月用新城疫IV系弱毒活疫苗全群饮水免疫一次。
　　&nbsp5.1.2 二、肉鸡
　　&nbsp7-10日龄，新城疫- 传支（120）二联苗滴鼻，同时每只鸡新城疫灭活疫苗皮下注射0.3ml。
　　&nbsp5.2把好疫苗质量和操作技术操作关（1）做好疫苗运输工作，保证其生物学活性。运输过程中用冰块包装以保障疫苗储运的环境，尽量做到使稀释后的疫苗在气温不高于15℃时，6h以内用完，在15℃-27℃时在3h内用完。（2）坚持一禽一针，避免交叉感染，注射针头长度要适宜，注射方法在妥当，以利于刺激机体。（3）禁止使用过期、失效、无标签、稀释后不溶解或保藏时间过长的疫苗。
　　&nbsp5.3定期进行鸡新城疫免疫抗体监测，可以掌握鸡群的抗体水平和注射鸡新城疫疫苗后的免疫效果，从而估测鸡群免疫注射日期范围，进一步完善免疫程序。
作者：肖梅仙 杨小冰 林静
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　增值电信业务经营许可证　旧院黑鸡疫苗免疫操作方法
旧院黑鸡疫苗免疫操作方法
作者：胡渠 　来源：万源市旧院黑鸡产业开发办公室
（一）滴鼻、点眼
1、用专用滴管或注射器，将疫苗滴入鼻孔或眼结膜内，以刺激上呼吸道、哈氏腺从而产生局部抗体。
2、为了操作方便，应左手把鸡头固定成水平位置（一侧眼鼻朝天，一侧眼鼻朝地）。剂量应均匀准确，每只鸡应得到一定量的疫苗。
３．疫苗滴加到眼和鼻内以后，应暂停片刻等到疫苗液确已被吸入后再将鸡放下。如果滴鼻时，疫苗不呼入鼻内，可以用手指堵住另一侧的鼻孔，或者用手指轻压住喉部。
4．滴口时注意滴头不要接触鸡的眼和鼻，以免引起呼吸道病传播。
5．有稀释液的疫苗瓶避免用手掌拿热，以免影响药效。
6．稀释液应用蒸馏水或凉开水，一般不用生理盐水，因为生理盐水较咸，滴入眼部或鼻孔刺激性较大，雏鸡易将生理盐水甩出。
7、疫苗应现用现配，避免时间过长。注意稀释好的疫苗必须在2个小时内完成。
8、滴眼滴鼻的疫苗和次数较多，如果长期连续滴同一方向易造成眼部结膜炎，因此，如果本次滴鸡左边眼鼻，下次则滴鸡右边眼鼻，如此轮换。
9．稀释液用量可以参考免疫程序中数据，但免疫程序中的数据仅是一个理论值，实际上滴瓶或滴管的孔径不完全一样，与理论值有一定误差，养殖户最好根据自己所用的滴管或针头试滴，确定每毫升多少滴，然后再计算出实际使用稀释液的用量。
计算方法：
(1)计算每滴多少毫升（Z）：先用一次性注射器抽出5毫升生理盐水倒入滴瓶内，再将滴瓶内的水缓慢滴完，计数5毫升水滴出多少滴（X1滴），再抽5毫升生理盐水倒入滴瓶内，再计数5毫升水滴出多少滴（X2滴），连续操作4次，计算出5毫升水滴出的滴数的平均值（Y滴），公式：Y
=(X1+X2+X3+X4)/5&4;再计数出每滴多少毫升（Z毫升），公式：Z =5/Y滴。
（2）计算每只鸡需稀释水多少毫升（F）:每只鸡滴眼滴鼻各一滴，共2滴，公式：F=Z&2。
（3）计算一瓶疫苗做多少个鸡（E）:每瓶疫苗羽份数为A,每只鸡需做的羽份数为B,公式：E=A/B,例如：如果每只鸡用1羽份，每瓶500羽份的疫苗可作500只；如果每只鸡用1.5羽份，每瓶500羽份的疫苗可作333只；如果每只鸡用2羽份，每瓶500羽份的疫苗可作250只。
（4）计算每瓶疫苗的稀释用水量多少毫升：公式：F&E。
10．免疫前、中、后１天不用消毒液消毒及洗刷饮水器、水槽，也不能用常规预疫药品，可以用电解多维饮水，增强抵抗力，减少免疫应激，作所有疫苗也要这样操作。
11．疫苗瓶和剩余疫苗应妥善处理（焚烧或深埋）。
12.做疫苗完成后，滴瓶可以进行煮沸消毒或酒精浸泡消毒。
（二）肌肉注射或皮下注射
注射免疫法是把疫苗注射到鸡的肌肉或皮下组织中，可使鸡吸收准确均匀，效果可靠。
具体操作注意事项：
１．注射器、针头及注射管，每次使用前要进行彻底的清洗消毒（水中煮沸２０分钟）。
２．用前先将疫苗摇匀，见分层后不能使用。
３．腿肌注射时要注入大腿外侧、肌肉最丰满处，避免注入肌健或小腿处，否则会引起腿肿。胸肌注射时，注射角度不要过大以３０～４５度为宜，避免损伤肝脏。
４．皮下注射应在颈部中段，做法是左手提起皮肤后，针头水平插入（推入疫苗时感觉起小泡），太靠下容易注入嗉囔内，太靠上，头部皮下不易吸收，易引起肿头。
５．注射各种疫苗时，应避免２种疫苗注在同一点上（可皮下或肌肉分开进行，也可各注一条腿）。
6、注射灭活疫苗时，为了防止疫苗因变质造成免疫反应，应先注射10只鸡进行观察30分钟，没有较强反应再继续操作。
（三）饮水免疫法
将一定量疫苗放入水中让鸡自由饮用，这样通过吞咽后的疫苗，病毒粒子经腭裂、鼻腔、肠道可产生局部免疫及全身免疫。比个体免疫省时省力，但鸡吸收多少疫苗量不均匀。
具体实施注意事项：
１．免疫前对免疫鸡群停水２～３小时（冬季４小时，夏季２小时），并根据饮水量取干净水。
２．要有足够的饮水器，且对器具用清水清洗干净。
３．不得在疫苗中加入维生素和抗生素，以免改变溶液的ｐＨ值（酸碱度）和渗透压。
４．疫苗保护剂用法：为了延长疫苗活性，保护剂加入１５～２０分钟后再放疫苗或用１％～２％脱脂奶加入一定量的左旋咪唑。
５．盛疫苗的容器不能用铁容器，可以用塑料桶。
（四）刺种法
此法为鸡痘苗接种时使用，用接种针在鸡的翼膜无血管处穿刺，通过在穿刺部位的皮肤处增殖产生免疫。
三、免疫注意事项
　（一）考虑母源抗体的干扰
雏鸡的母源抗体可以抵抗疾病的早期感染，但妨碍早期免疫应答。一般鸡新城疫的母源抗体3周后完全消失，传染性法氏囊病的母源抗体可持续2－3周。一般情况下，供种场提供的免疫参考程序如新城疫、法氏囊均考虑了母源抗体的因素，按其进行首免一般是不会出问题的。但是，不同种鸡场提供的种鸡需要不同的免疫程序，否则会受到母源抗体的干扰，造成首免失败。为了防止母源抗体干扰，确保免疫整齐一致，最好从具有一定生产规模的种鸡场进鸡，以保证购进的鸡苗母源抗体均匀一致。
　（二）避免各种疫苗之间相互干扰　
现在鸡病越来越多，养鸡场需进行多种疾病的免疫，有时需用联苗或几种免疫同时进行，因此接种时必须考虑各种疫苗间的相互配合，以减少相互间的干扰，达到理想的免疫效果。对当地流行严重的传染病，最好采取单苗接种，以便产生坚强的免疫力。
　（三）建立免疫接种档案
　免疫接种记录档案对种鸡场是必不可少的，它是验收种鸡场时必须考察的一个项目，它使各种免疫有据可查、成败可考，因此务必作好免疫详细记录，健全档案。记录内容至少应包括：接种日期、鸡的品种、日龄、数量、所用疫苗名称、生产厂家、批号、生产日期、有效期、稀释剂及稀释倍数、接种方法、操作人员等。
　（四）观察鸡群接种后的反应
　对鸡群而言免疫接种后，并不是万事大吉，而是要更加认真细心的观察其各种反应，特别是有无异常反应，应根据具体情况，必要时采取适当的补救措施，避免恶性传染病的流行。弱毒苗接种10天、灭活苗接种15天后应监测抗体，以判断免疫效果，尤其是启用新的免疫程序，使用新的疫苗种类时，更应及时监测，求证效果，保证免疫应答成功。
（五）使用疫苗的注意事项
1、疫苗应现配现用，并远离热源。
2、若采用点眼、滴鼻法，操作要迅速，还要防止漏滴和甩头。若采用饮水法，应预先停水2-3小时，疫苗用量要加倍，饮水器具要充足并保持适宜的育雏室温度。
3、为防止各种应激反应，在雏鸡进行免疫前2-3天，要给雏鸡群补充复合维生素。
4、注意观察鸡群的健康情况；若发现鸡群发病应暂缓用苗，或先对健康鸡群用苗；患病者等病愈后再用。
5、提前搞好鸡舍消毒工作，在用苗后3天内，禁用一切杀菌剂，杀虫剂和消毒剂。
6、领取疫苗时一定要用保温箱盛装，并按正确的方法保存好疫苗。
7、在进行饮水免疫、点服或滴鼻免疫之前24小时和之后36小时内最好都不要进行鸡消毒和饮水消毒。
8、疫苗接种对鸡的应激较大，很容易诱发呼吸道病，因此在疫苗接种后应适当添加一些维生素、抗生素等药物进行防治，如速补或多维、红霉素或严迪等
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