5－Br－PADAP测定血清总铁结合力
５－Ｂｒ－ＰＡＤＡＰ测定血清总铁结合力温州医学院附属二医检验科（３２５００３）丁红香温州医学院化学教研组杨小风用温州医学院化学教研组研制东瓦生物工程试剂厂生产的５－Ｂｒ－ＰＡＤＡＰ（２－（５－溴－２－吡啶偶氮）－５－二乙氨基酚），按说明书操作。线性范围在１７．９～１０７．４μｍｏｌ／Ｌ，Ｙ＝０．０...&
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作者曾建立了以2(5溴2吡啶偶氮)5二乙氨基酚(5 Br PADAP)为显色剂、双试剂自动分析法测定血清铁[1]、血清不饱和铁结合力(UIBC)的新方法[2]。由于血清铁和血清UIBC之和即为血清总铁结合力(TIBC),本文尝试以计算法测定血清TIBC值,以避免传统碳酸镁吸附法[3]测定血清TIBC时,需对标本进行沉淀、离心等预处理步骤,而无法应用于全自动生化分析仪器的缺点。报道如下。1材料和方法1·1仪器UV 2201型紫外分光光度计(日本岛津)、Beckman LX 20型全自动生化分析仪、pH 3C型酸度计(上海雷磁分析仪器厂)。1·2试剂1·2·1血清铁5-Br-PADAP法测定试剂同文献[1]所用试剂。1·2·2血清未饱和铁5-Br-PADAP法测定试剂同文献[2]所用试剂。1·2·3血清铁标准液35·8μmol/L,血清未饱和铁结合力标准品:100μmol/L,均由温州维日康生物科技有限公司提供。1·3方法1·3·1...&
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血清总铁结合力(TIBC)是指血清转铁蛋白可结合全部铁的能力,其含量的高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生、发展密切相关。临床目前使用的测定TIBC方法需要沉淀、离心等步骤,无法应用于全自动生化分析仪[1]。作者已建立了以2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-二乙氨基酚(5-Br-PADAP)为显色剂、双试剂自动分析法测定血清不饱和铁结合力(UIBC)的新方法[2],本文在此基础上,建立了以5-Br-PADAP为显色剂、三试剂自动分析法测定血清总铁结合力(TIBC)的新方法。研究结果表明,用5-Br-PADPAP自动分析法测定血清TIBC,具有快速、灵敏、线性范围宽、测定试剂稳定等特点,适合临床推广应用。1原理第一步,在pH 8·6 Tris-HCl缓冲液中,过量的铁离子将血清中未与铁结合的转铁蛋白全部饱和。第二步,5-Br-PADAP与缓冲液中未与转铁蛋白结合的铁离子发生灵敏的显色反应,记录反应体系的吸光度A1。第三步,血清铁解...&
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５—Ｂｒ—ＰＡＤＡＰ法测定血清总铁结合力化学教研室杨小凤附二院检验科丁红香血清总铁结合力测定在临床上有重要的意义，但至今尚未有较理想的测定方法。我们参考了有关文献（１）（２），摸索出用铁试剂盒测定血清总铁结合力的方法──５—Ｂｒ—ＰＡＤＡＰ法。此法具有准确度高，耗血量少，操作简便，耗时短等优点，现报道如下。１材料、方法和结果１．１材料：①《血清铁快速灵敏检测》试剂盒（２）②轻质碘酸镁粉末（ＡＲ）。③１０μｇ／ｍｌ铁标准液。１．２操作方法：于一试管中加入血清０．３ｍｌ，铁标准液（１０μｇ／ｍｌ）０．２ｍｌ和去离子水０．ｌｍｌ，混匀，放置室温１０分钟后，加碳酸镁粉末２０ｍｇ，再放置１０分钟，并振摇数次，后经２５００ｒ／ｍｉｎ离心１０分钟，取上清液０．３ｍｌ，以此上清液代替血清，按铁试剂盒（２）的操作方法测定，测定结果按以下公式计算；总铁结合力（μｍｏｌ／Ｌ）＝×７１．６１．３结果１．３．１碳酸镁粉末加入量试验：试验结果，碳酸镁粉未的...&
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血清总铁结合力(TIBC)是指血清转铁蛋白可结合全部铁的能力,其值可以由血清铁和血清未饱和铁(UIBC)含量相加得到,已有作者使用水溶性偶氮染料2-(5-硝基-2-吡啶偶氮)-5-[N-正丙基-Ⅳ-(3-磺酸丙基)氨基]苯酚二钠(n itro-PAPS)为显色剂计算法测定血清TIBC值[1]。本文参考有关文献[2,3],尝试使用另一种水溶性偶氮染料2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-[N-正丙基-N-(3-磺酸丙基)氨基]苯酚(5-B r-PAPS)为显色剂计算法测定血清TIBC值,结果令人满意。报道如下。1材料与方法1·1仪器UV-2201型紫外分光光度计(日本岛津),Beckm an LX-20型全自动生化分析仪,pH S-3C型酸度计(上海雷磁分析仪器厂)。1·2试剂1·2·1血清铁5-B r-PAPS法测定试剂[2]试剂I含维生素C 2 g/L、Tween 80 5 m l/L、pH4·0 HAc-NaAc缓冲液80 mm...&
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我们曾建立了以新的水溶性偶氮类染料2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-[(N,N-二羧基甲基)氨基]苯酚(5-B r-PADCAP)为显色剂、双试剂自动分析法测定血清铁[1]、血清不饱和铁结合力(UIBC)的新方法,由于血清铁和血清UIBC之和即为血清总铁结合力(TIBC),本文尝试以计算法测定血清TIBC值,以避免传统碳酸镁吸附法[2]测定血清TIBC时需对标本进行沉淀、离心等预处理步骤而无法应用于全自动生化分析仪器的缺点。报道如下。1材料与方法1.1仪器UV-2201紫外分光光度计(日本岛津)、Beckm an LX-20全自动生化分析仪、pH-3C酸度计(上海雷磁分析仪器厂)。1.2试剂1.2.1血清铁5-B r-PADCAP法测定试剂[1]试剂I含维生素C、表面活性剂、掩蔽剂、血清铁解离剂、pH 6.5 HAc-NaAc缓冲液;试剂II含5-B r-PADCAP、聚氧乙烯类表面活性剂。1.2.2血清未饱和铁5-B r-PA...&
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39自动生化分析法直接测定血清总铁结合力_胡云良
600中国卫生检验杂志2006年5月第16卷第5；【卫生与临床】；自动生化分析法直接测定血清总铁结合力；胡云良,徐晓杰,陆永绥,文芳；(11温州医学院附属第二医院检验科,浙江温州32；[摘要]目的:建立一种适合于自动生化分析仪检测的；条件下,Fe3+与转铁蛋白亲和性不同,在维生素C；[文献标识码]B[文章编号](；01389g溶于200ml
600中国卫生检验杂志2006年5月第16卷第5期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,May2006;Vol16 No5【卫生与临床】自动生化分析法直接测定血清总铁结合力胡云良,徐晓杰,陆永绥,文 芳1122(11温州医学院附属第二医院检验科,浙江温州 温州医学院检验医学院,浙江温州 325035)[摘要] 目的:建立一种适合于自动生化分析仪检测的直接测定血清总铁结合力的方法。方法:利用pH410及pH814条件下,Fe3+与转铁蛋白亲和性不同,在维生素C的作用下,游离Fe3+被还原成Fe2+后与亚铁嗪反应所形成紫红色复合物的量差异来反映血清中总铁结合力浓度高低。结果:线性范围达15711Lmol/L,批内CV值小于318%,批间CV值小于414%,本法(Y)与碳酸镁吸附手工法(X)及Beckman公司的总铁结合力试剂盒法(X)进行比较,回归方程分别为Y=-X,Y=-X,相关系数r分别为。胆红素76Lmol/L、甘油三酯3181mmol/L、血红蛋白1139g/L、镁离子512mmol/L、锌离子1125mmol/L、铜离子0143mmol/L以下对本法测定总铁结合力无干扰。结论:该方法简便、准确、微量、特异性强,适合于自动生化分析仪检测。[关键词] 总铁结合力;亚铁嗪;自动分析[中图分类号] R446111[文献标识码] B
[文章编号] 06)05-0600-0201389g溶于200ml去离子水中。TIBC血清型校准液46Lmol/L,由Randox公司提供。BeckmanCoulter原装总铁结合力试剂盒(微柱过滤法)及配套定标液,总铁结合力试剂盒批号为SYN-171。113 仪器日立7170型自动生化分析仪,UV2201紫外可见分光光度仪(岛津)。114 分析参数设置反应类型:两点终点法;波长:570nm(主)/660nm(次);样品:20L;l试剂R1:200L;l第5点加试剂R240L;l第17点加试剂R380Ll。每点读数时间间隔约1716s。读点时间:16点与34点。115 统计分析采用SPSS1010统计软件对相关资料进行分析。自动生化分析法直接测定总铁结合力法与碳酸镁吸附手工法及Beckman原装总铁结合力试剂盒的对比试验均采用回归相关分析及配对t检验。2 结果211 吸收曲线按本法对校准管和测定管进行显色,在UV2201紫外可见分光光度仪上扫描,测得pH410和pH814的显色反应条件下络合物的最大吸收波长均为562nm。212 反应时间进程曲线取总铁结合力浓度为9112Lmol/L的血清标本,在日立7170型自动生化分析仪上进行测定,反应时间进程曲线见图1。血清总铁结合力(TIBC)测定是缺铁性贫血等疾病的常规检测项目。临床实验室测定总铁结合力(TIBC)常用方法及改良方法中均采用不同的吸附剂,在血清转铁蛋白与铁充分结合后,对多余铁进行吸附、离心预处理。此类方法存在标本用量大、操作繁琐、影响因素多等缺点。参阅国内外有关文献[1~3],我们建立了直接法测定血清总铁结合力,适合于自动生化分析仪检测。我们建立了的方法不需要对血清进行前处理,测定的全过程由生化分析仪自行完成,标本用量少,结果准确。现报道如下:1 材料与方法111 原理在pH814的条件下,血清转铁蛋白与含过量铁的铁溶液中Fe3+结合,未结合的Fe3+经维生素C还原成Fe2+后,与亚铁嗪反应生成紫红色复合物,于570nm处读取吸光度值。再加入pH210的酸性缓冲液,使反应系统pH为410,结合的Fe3+与转铁蛋白发生解离,同理发生显色反应,再读取溶液的吸光度值。增加的吸光度值与TIBC浓度成正比。112 试剂铁贮存液(Fe3+1179mmol/L):称取经室温干燥恒重的优级硫酸高铁铵[Fe(NH4)#(SO4)2#12H2O]018635g置于1L容量瓶中,加去离子水50m,l并逐滴加入浓硫酸5m,l溶解后补足去离子水至刻度即为铁贮存液。Tris-HCl缓冲液(pH814):含Tris300mmol/L,NaHCO3150mmol/L,TritonX-100412g/L。称取Tris181171g,NaHCO361301g,量取TritonX-100约2ml溶于500ml的去离子水中。试剂Ⅰ(R1):将1179mmol/L的铁贮存液用Tris-HCl缓冲液(pH814)100倍稀释,调pH至814。试剂Ⅱ(R2):称取亚铁嗪012463g溶于50ml去离子水中,作为A液(亚铁嗪10mmol/L)。称取维生素C010574g溶于10mlA液中作为试剂Ⅱ,R2试剂可稳定2周。试剂Ⅲ(R3):含枸橼酸600mmol/L,硫脲2516mmol/L。称取枸橼酸251216g,硫脲[作者简介] 胡云良(1966-),男,硕士,副教授,主要从事临床生物化学教学、科研及临床实验室工作。图1 自动生化分析法直接测定总铁结合力反应时间进程曲线中国卫生检验杂志2006年5月第16卷第5期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,May2006;Vol16 No5601213 线性范围用TIBC高值血清(15711Lmol/L)、低值血清(3113Lmol/L)按照1/9,2/8,4/6,6/4,8/2,9/1的比例混合配制成系列浓度,按本方法在日立7170型自动生化分析仪上进行测定,对理论浓度与实测浓度进行回归,回归方程为Y=-X,相关系数为r=01999,表明线性范围可达15711Lmol/L,见图2。图3 自动生化分析法直接测定总铁结合力法与碳酸镁吸附手工法比较图2 自动生化分析法直接测定总铁结合力理论浓度与实测浓度比较214 重复性试验采用NCCLS(EP5-A)评价方案,收集混合血清A和B,A的TIBC浓度为5512Lmol/L,B的TIBC浓度为3517Lmol/L,分装冷冻保存,供重复性实验用。结果:A批内CV值为314%,批间CV值为410%。B批内CV值为318%,批间CV值为414%。215 干扰试验在一份TIBC浓度为5617Lmol/L的混合血清中加入下列干扰物,结果显示:血红蛋白浓度小于等于1139g/L时,胆红素浓度在小于等于76Lmol/L时,甘油三酯浓度在小于等于3181mmol/L时,镁离子浓度在小于等于512mmol/L时,锌离子浓度在小于等于1125mmol/L时,铜离子浓度在小于等于0143mmol/L时,对TIBC的测定结果无干扰。216 方法对比试验用本法(Y)与碳酸镁吸附手工法(X)对40份浓度为Lmol/L的标本进行检测比较,回归方程为Y=-X,相关系数为r=01981。经配对资料t检验,t=3114,P=01003,两者差别有统计学意义。本法(Y)与美国Beckman公司的原装总铁结合力(微柱过滤法)试剂盒(X)对40份浓度为Lmol/L的标本进行检测比较,Y=-X,相关系数为r=01988。经配对资料t检验,t=01799,P=01423,两者差别无意义(见图3,图4)。217 参考范围用本法测定81例健康成人(其中男46例,女45例,年龄18~55岁)血清TIBC的含量,结果为:(?s)Lmol/L,参考范围为Lmol/L。3 讨论血清总铁结合力表示血清中转铁蛋白利用铁的生理活性。常规测定总铁结合力方法及多种改良方法中需采用碳酸镁、铁交换树脂、氧化铝等吸附剂吸附多余的未结合铁,经离心去除吸附剂后再显色测定。这些方法标本用量大,操作繁琐,影响结果的因素较多。本方法采用改变反应体系中的pH值,使碱性条件下转铁蛋白对铁的吸附、在酸性条件下转铁蛋,不必图4 自动生化分析直接测定总铁结合力法与Beckman微柱法比较去除多余的铁,简化了操作步骤,使测定结果更加准确可靠。标本用量少,仅需20L,l而手工法标本用量需要300Ll以上。转铁蛋白在酸性条件下释放结合的铁离子速度与反应体系中pH值有关,当pH值过高时,铁离子释放不完全。pH过低时,血清蛋白易发生沉淀使溶液变浑浊。本法选择pH410,既保证铁的完全释放,又保证蛋白不发生沉淀,使反应体系保持清澈[3]。在试剂配方中,我们将试剂Ⅰ中的铁浓度降为1719Lmol/L,将标本用量与试剂Ⅰ用量比例降为1B10,从理论上能保证含量为170Lmol/L以下的TIBC测定。同时可以降低测定过程中未结合的多余铁显色对检测灵敏度的影响,有利于检测灵敏度的提高,线性上限可达15711Lmol/L,优于Yamanishi建立的方法[1]。采用两点终点法,可以减少样品空白干扰,明显的溶血、黄疸及脂浊对测定结果无影响。镁离子、锌离子、铜离子等浓度高于正常上限5倍以上对总铁结合力的测定结果无干扰,表明本法有较高的特异性。总之,该方法具有简便、准确、微量、特异性强等特点,适合于自动生化分析仪检测。自方法建立到现在我们已测定了500多份标本的总铁结合力浓度。实践证明该方法非常实用,不失为血清总铁结合力测定的一种新方法,值得推广应用。[参考文献][1]YamanishiH,IyamaS,YamaguchiY,etal1Modificationoffullyauto-matedtotaliron-binding(TIBC)assayinserumandcomparisonwithdimensionTIBCmethod[J]1ClinChem,):[2]YamanishiH,KimuraS,IyamaS,etal1Fullyautomatedmeasurementofiron-bindingcapacityinserum[J]1ClinChem,):[3]汪毅,闻平,叶立新1一种改良法测定血清总铁结合力[J]1江苏大学学报(医学版),):69-701(收稿日期:)包含各类专业文献、外语学习资料、生活休闲娱乐、文学作品欣赏、中学教育、行业资料、专业论文、39自动生化分析法直接测定血清总铁结合力_胡云良等内容。总铁结合力 Flex 试剂盒_百度百科
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转铁蛋白与总铁结合力的相关性研究
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