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凡纳滨对虾铁蛋白基因的克隆与表达--《泉州师范学院学报》2011年06期
凡纳滨对虾铁蛋白基因的克隆与表达
【摘要】:以凡纳滨对虾为研究对象,通过RT-PCR技术扩增出铁蛋白(Ferritin)基因,经特定的酶切(Not1,Sma1)后插入到表达质粒pGEX-4T-2上构建表达载体,重组质粒转化大肠杆菌.经菌落PCR和质粒双酶切鉴定确认,证实成功地构建了对虾铁蛋白基因的原核表达载体.再对重组菌用IPTG诱导表达,采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析得到目的蛋白用于制备抗体,为研究铁蛋白在对虾抗病毒免疫中的作用奠定基础.
【作者单位】:
【关键词】:
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【分类号】:S917.4【正文快照】:
铁元素是生物有机体中一种必不可少的元素,其在生物体中含量的高低对维持细胞的正常生长与代谢有着非常重要的作用[1].铁蛋白(ferritin,Ft)是广泛存在于生物体的铁贮藏蛋白,能够在大多数的有机体中找到.不同生物的铁蛋白在一级结构上的保守性较低,但结构体系相同.整个铁蛋白
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【参考文献】
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铁蛋白抗体
英文名: Anti-Ferritin
类别: 抗体
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会员等级: VIP会员 第2年
实名备案: 已实名备案
经济性质: 私营独资企业
经营模式: 贸易商,
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联系地址: 上海市闵行区元江路5500号第2幢1426室
产品详细说明
产品规格:1mg/1ml
牌:知名抗体品牌
地:上海、美国、北京
产品包装:0.2ml/200μg
格:1元/支
铁蛋白抗体
储存时间:抗体相当稳定。如果能严密封口防止挥发,它们能存放于4℃下达数月而不损失活性。曾有报道,储存于&20℃的抗体其活性保持达几十年。
公司能提供的抗体种类有兔、人、小鼠、大鼠、牛等,拥有三万多种,同时,公司一直在研究新抗体,并不时,推出抗体新品。
价格、新品、品牌、说明书、报价、厂家、厂价等信息详情,可来电咨询!
英文名称& Anti-Ferritin &&&&&&&&
中文名称& 铁蛋白抗体&&&&&&&&&
铁蛋白抗体
别&&& 名& F Ferri Ferritin heavy polypeptide 1; Ferritin L Ferritin L F Ferrit Ferritin light polypeptide like 3; Fe FHC; FTH; FTH1; FTHL6; FTL; FTL FTMT; L MGC71996; Mi MTF; PIG15; PLIF. &&&&&&&&
浓&&& 度& 1mg/1ml &&&&&&&&
规 格& 0.1ml/100&g& 0.2ml/200&g&&&& &&&&&&&&
抗体来源& Rabbit& &&&&&&&&
克隆类型& polyclonal &&&&&&&&
交叉反应& Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep&&&&&&&&
产品类型& 一抗&&& &&&&&&&&
研究领域& 心血管 细胞生物 免疫学 神经生物学& &&&&&&&&
蛋白分子量& predicted molecular weight: 20kDa &&&&&&&&
性&&& 状& Lyophilized or Liquid &&&&&&&&
免 疫 原& KLH conjugated synthetic peptide derived from human Ferritin (22-71aa) &&&&&&&&
亚&&& 型& IgG &&&&&&&&
纯化方法& affinity purified by Protein A &&&&&&&&
储 存 液& 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide &&&&&&&&
产品应用&& WB=1:100-500& ELISA=1:500-1000& IP=1:20-100& IHC-P=1:100-500& IHC-F=1:100-500& IF=1:100-500 &&&&&&&&
(石蜡切片需做抗原修复) &&&&&&&&
&not yet tested in other applications.&&&&&&&&
&optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.& &&&&&&&&
保存条件& Store at -20 &C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20&C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 &C. &&&&&&&&
Important Note& This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.&&&&&&&&&
铁蛋白抗体
产品介绍 This gene encodes the heavy subunit of ferritin, the major intracellular iron storage protein in prokaryotes and eukaryotes. It is composed of 24 subunits of the heavy and light ferritin chains. Variation in ferritin subunit composition may affect the rates of iron uptake and release in different tissues. A major function of ferritin is the storage of iron in a soluble and nontoxic state. Defects in ferritin proteins are associated with several neurodegenerative diseases. This gene has multiple pseudogenes. Several alternatively spliced transcript variants have been observed, but their biological validity has not been determined. [provided by RefSeq, Jul 2008].&&&&&&&&
Function : Stores iron in a soluble, non-toxic, readily available form. Important for iron homeostasis. Has ferroxidase activity. Iron is taken up in the ferrous form and deposited as ferric hydroxides after oxidation. Also plays a role in delivery of iron to cells. Mediates iron uptake in capsule cells of the developing kidney.&&&&&&&&
Subunit : Oligomer of 24 subunits. There are two types of subunits: L (light) chain and H (heavy) chain. The major chain can be light or heavy, depending on the species and tissue type. The functional molecule forms a roughly spherical shell with a diameter of 12 nm and contains a central cavity into which the insoluble mineral iron core is deposited.&&&&&&&&
Similarity : Belongs to the ferritin family.&&&&&&&&
Contains 1 ferritin-like diiron domain.
储存温度:存在于血清、组织培养上清液或腹水中的抗体在&20℃下能够长期储存。低温存放不会损伤抗体活性。抗体的工作液通常储存于4℃中。此温度下,抗体的活性能稳定数月至数年亦不损失。抗体溶液不应反复冻融,因为反复冻融将导致
铁蛋白抗体
失活并产生不需要的蛋白&蛋白凝聚物。抗体的凝聚能导致活性丧失。这是由于抗原结合位点的空间构象被破坏,或由于产生的不溶物被离心或过滤而除去。
冷凝蛋白类的抗体不能存放于4℃。因为在4℃下此类抗体会发生沉淀。一些鼠源性IgG3亚类的抗体有此特性。如果抗体在4℃下发生沉淀,就应该存放于室温下的叠氮钠溶液中。
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铁蛋白抗体
时应计算实验所需要的抗体用量,对于有些方法如免疫亲和纯化,不可能提供所需要的抗体量,因此需要寻找其他抗体来源。
上海纪宁实业有限公司成立于上海,在上海张江高科园区拥有独立实验室,公司主力提供的生化产品有:酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)、标准品、对照品、抗体、生化试剂、培养基、血清、细胞株、金标试剂盒等试剂产品。 公司是一家集研究、生产、销售、售后技术为一体的高端创新型企业,现有技术研究人员22人,生产人员100多人,销售人员10余人,其中海外留学生2人、博士生6人、双硕士学位研究生3人,党员7人,76%公司人员取得学士学位,其中有大多数员工还在职学习、进修,随着公司业务的发展,公司正筹备在华北、华中、华南等地区设办事处(华东办事处现已设在总部&&上海) 公司以热忱的态度,广迎天下客,现在跟公司长期合作的科研单位及重点大学实验室有:复旦大学生命科学学院、同济大学生命科学与技术学院、北京大学生命科学学院、生物大分子实验室(中国科学院)、四川大学生物技术研究中心、南开大学分子生物学研究所、卫生部成都生物制品研究所等国家重点实验室及科研单位。
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血清转铁蛋白受体和血清铁蛋白在鉴别&慢性病贫血和缺铁性贫血价值的评价
来源:青年人()&更新时间: 16:54:16 &【字体: 】
 慢性病贫血(anemia of chronic disease,ACD)和缺铁性贫血(IDA)是最常见的两种贫血,约占贫血的70%~80%。这两种贫血鉴别有困难,尤其在感染、肿瘤、炎症时。近年来血清转铁蛋白受体(serum transferrin receptor,sTfR)已被应用于诊断缺铁,但sTfR及其与血清铁蛋白(serum ferritin,SF)组成的复合参数诊断的价值少有报道,我们应用临床流行病学方法对此进行了研究,现将结果报告如下。
对象和方法
1 研究对象 我院各科住院患者,血液科及类风湿科门诊患者,以骨髓铁染色阴性作为诊断缺铁标准,将研究对象分为以下几组:1.1 单纯IDA组:符合IDA的诊断标准[1],无慢性炎症、感染、恶性疾病存在,共36例,男6例,女30例。1.2 慢性病伴贫血组:共54例,其中恶性肿瘤16例(肝癌7例,胃癌6例,直肠癌1例,胰腺癌2例);结缔组织病30例(类风湿性关节炎20例,系统性红斑狼疮7例,白塞病1例,皮肤结节性变应性血管炎1例,Still病1例);慢性感染8例(慢性尿路感染3例,结核病4例,隐球菌性脑膜炎1例)。上述病例按骨髓涂片铁染色分为ACD和慢性病伴缺铁(chronic disease with iron deficiency,CDID):①ACD组:骨髓涂片有可染铁共23例,男9例,女14例;②CDID组:骨髓中无可染铁者共31例,男9例,女22例。1.3 健康对照组:献血员29名,男14名,女15名。1.4 如下情况的患者予以排除:血液系统恶性肿瘤;溶血性贫血、叶酸和VitB12缺乏而引起的巨幼细胞性贫血;在采取血标本前已经口服铁剂治疗或输血。2 检查项目及测定方法2.1 血清转铁蛋白受体(sTfR)测定:试剂盒由美国R&D System公司生产,用ELISA方法测定。2.2 其它铁参数:血常规采用血细胞自动分析仪法;血清铁(SI)和总铁结合力(TIBC)采用双吡啶法;SF测定应用放射免疫双抗体法。2.3 sTfR与SF的复合参数:包括sTfR/logSF、sTfR/SF。2.4 骨髓穿刺涂片铁染色:富含骨髓小粒的涂片亚铁氰化钾染色(健康对照组未作骨髓穿刺)。3 资料分析 应用STATA5.0软件进行统计学分析。3组间铁参数的比较用方差分析或Kruskal-Wallis检验;利用ROC Analyzer(SV0.9B)软件比较几种常用铁参数相应的ROC(receiver operator characteristic,ROC)曲线下面积及P值(采取单侧检验),比较铁参数的优劣;计算sTfR在各个区间段的似然比(likelihood ratio,LR)。
1 3组疾病患者和正常对照组的年龄构成 IDA、CDID、ACD及正常对照组年龄的均值±标准差分别为(46.2±15.2)岁,(42.4±19.1)岁,(49.3±17.6)岁和(39.0±16.0)岁,经统计学处理差异无显著性(F=1.88,P=0.137),各个铁参数之间在年龄上具有可比性。2 正常对照组sTfR的检测结果 sTfR在正常男女两性间均值±标准差(中位数)分别为(33.0±10.6)nmol/L(31.86nmol/L)、(29.8±7.6)nmol/L(27.1nmol/L),差异无统计学意义(t=0.29,P=0.77)。对照组总体sTfR为(31.37±9.16)nmol/L,正常均值95%的可信区间为27.9~34.9nmol/L。3 各项铁参数测定 结果见表1。除TIBC外,其它几种铁参数在3组贫血间差异均有显著性(P<0.05)。4 SF和sTfR阳性结果的似然比、敏感度和特异度 以SF<14μg/L作为判断贫血病例缺铁的临界值[1],敏感度为0.44(95%CI:0.34~0.54),特异度0.91(0.85~0.91),准确度0.59,在这个测定值区段LR最大。在ACD+CDID组,应用
表1 3组贫血患者各项铁参数的实验室检测结果
sTfR(nmol/L)
TIBC(μmol/L)
SI(mmol/L)
sTfR/logSF
50.4±15.3
77.9±26.5
10.96(7.90)
8.30(8.75)
19.0(27.6)
5.60(6.59)
36.6±18.7
72.4±24.5
9.34(13.00)
79.30(46.6)
0.35(0.46)
24.0±12.5
63.1±12.8
10.8(12.4)
5.83(20.00)
208.00(423.00)
  注:sTfR、TIBC检测结果以均值±标准差表示;SI、TS、SF、sTfR/logSF、sTfR/SF检测结果以均值表示,括号内数值为中位数  该临界值判断缺铁时的敏感度为0.12(0.03~0.21),准确度为0.5。在慢性病伴有贫血时,SF在25~44μg/L时的LR值最大,但此时的准确度也只有0.63。不论在总的贫血病例中或慢性病伴贫血病例中,sTfR>50nmol/L时的LR值最大。5 ROC曲线下面积(AUCROC)的计算及有关临界值的确定 由表2可见,从总的贫血病例或慢性病伴贫血的病例中区别IDA和ACD,SI和TS的AUCROC均较小。TIBC在判断总的贫血病例是否存在缺铁时AUCROC为0.73,而在判断慢性病是否伴缺铁时AUCROC只有0.68。SF在判断总的贫血病例是否有缺铁时,AUCROC是0.87,鉴别IDA和ACD时AUCROC为0.94,但在判断慢性病是否存在缺铁时只有0.77。sTfR在3组病例中判断是否有缺铁其AUCROC均较其它几种铁参数为大。  比较sTfR和SF在鉴别ACD和CDID时的AUCROC,二者差异有统计学意义(P<0.05)。sTfR/SF和sTfR/logSF的比值在判断3组贫血病例是否缺铁的AUCROC与sTfR相比无明显增大(见表2)。
表2 几种铁参数在诊断缺铁时的ROC曲线下的面积(±s)
IDA+CDID与ACD
0.72±0.06
0.89±0.05
0.57±0.09
0.68±0.08
0.70±0.09
0.66±0.09
0.67±0.09
0.73±0.09
0.72±0.07
0.73±0.07
0.72±0.09
0.68±0.09
0.87±0.05
0.94±0.04
0.77±0.07
0.90±0.04
0.96±0.03
0.84±0.06
0.87±0.05
0.95±0.03
0.74±0.07
sTfR/log SF
0.85±0.04
0.89±0.06
0.83±0.06
  IDA与ACD的鉴别具有重要的临床意义,特别是在慢性病伴贫血病例中如何诊断缺铁是一个临床难题。我们采用临床流行病学方法对常用铁参数进行了系统的评价,获得了不少有益的结论,分述如下。  sTfR是新的铁参数,是反映缺铁性红细胞生成的指标。80%以上的转铁蛋白受体存在于骨髓红系细胞表面,转铁蛋白受体调控二铁转铁蛋白(diferric transferrin)由胞外向胞内转运铁的速度,细胞表面的受体数受铁的需要量调节,与缺铁的程度呈正相关,sTfR是转铁蛋白受体的一个片段,与机体总的转铁蛋白受体成比例[2,3]。sTfR用于诊断缺铁的优越性在于具有较强的特异性,测定值较少受炎症及恶性疾病的影响,且无显著的性别差异。虽然sTfR可反映骨髓造血功能,但患有慢性感染、炎症、肿瘤等疾病时由于细胞因子的作用,如肿瘤坏死因子α和白细胞介素1水平的增高,阻抑骨髓红系增殖,也可影响TfR的表达,因此本组CDID时sTfR的水平比单纯IDA低,但仍明显高于ACD患者,ACD患者的sTfR水平也低于正常参考值,因此并不影响sTfR在慢性病伴贫血病例中诊断缺铁的价值。我们所选取的病例采用sTfR&26.5nmol/L作为缺铁诊断的临界值,此时的敏感度和特异度均为80%。  SF在诊断单纯IDA时的准确度可达95%[4],是反映贮存铁缺乏的可靠指标,在区别单纯性IDA与ACD时有较强的鉴别能力。SF的最大缺点是测定值易受炎症及恶性疾病的影响而升高,影响了缺铁的诊断。WHO将SF<12μg/L(国内常用<14μg/L)作为诊断缺铁的标准仅适用于单纯性IDA诊断。我们的研究表明应用于单纯性IDA和慢性病伴贫血中诊断缺铁需要制定2种标准。  文献报道sTfR与SF呈负相关,采用复合参数sTfR/SF与sTfR/logSF的比值可提高缺铁诊断的敏感度[5-8]。我们的研究也说明复合参数有较高的诊断和鉴别诊断价值,但均未胜过sTfR。  常规的铁参数如SI、TIBC、TS对于IDA和ACD的鉴别价值不大,红细胞平均体积(MCV)在鉴别单纯性IDA与ACD时有一定的鉴别能力,在3组贫血病例的TIBC差异并无统计学意义,这和我们以往认为TIBC在鉴别IDA与ACD的价值要优于MCV有所不同。
作者单位:陈波斌(200040 上海医科大学华山医院)     林果为(200040 上海医科大学华山医院)     倪赞明(200040 上海医科大学华山医院)     周嘉陵(上海市光华医院)
参 考 文 献
[1]张之南,主编.血液病诊断及疗效标准.第1版.天津:天津科学技术出版社,.[2]Flower CH,Skikne BS,Covell AM,et al.The clinical measurement of serum transferrin receptor.J Lab Clin Med,-377.[3]Beguin Y,Huebers HA,Josephson B,et al.Transferrin receptors in rat plasma.Proc Natl Acad Sci U S A,-640.[4]林果为,黄一薇,林佩娣,等.四种常用铁参数对铁缺乏症诊断价值的评价.中华血液学杂志,2-284.[5]Guyatt GH,Oxman AD,Ali M,et al.Laboratory diagnosis of iron deficiency anemia:an overview.J Gen Intern Med,-162.[6]Skiknes BS,Flowers CH,Cook JD.Serum transferrin receptor:a quantitative measure of tissue iron deficiency.Blood,0-1876.[7]pettersson T,Kivivuori SM,Siimes MA.Is serum transferrin receptor useful for detecting iron deficiency in anemic patients with chronic inflammation diseasesBr J Rheumat,-744.[8]Punnonen K,Irjala K,Rajamaki A.Serum transferrin receptor and its ratio to serum ferritin in the diagnosis of iron deficiency.Blood,2-1057.
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